[發明專利]一種使用漆酶催化合成水飛薊賓的方法

有效

• 申請號: 201510816624.5
• 申請日: 2015-11-20
• 公開（公告）號: CN105400843B
• 公開（公告）日: 2019-01-04
• 發明（設計）人: 周景文;陳堅;呂永坤;烏仁嘎;堵國成;丁仁鵬
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12P17/16
• 分類號: C12P17/16
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 耿曉岳

本發明公開了一種使用漆酶催化合成水飛薊賓的方法，屬于生物化工領域。本發明以漆酶催化松柏醇和黃杉素合成了水飛薊賓的4種同分異構體。該反應在水相中進行，避免了有機溶劑的使用；反應的效率較高，在1h內即可生成0.9694mg/L水飛薊賓。該方法是一種安全且高效的合成水飛薊賓合成方法。

技術領域

本發明涉及一種使用漆酶催化合成水飛薊賓的方法，屬于生物化工領域。

背景技術

水飛薊素(Silymarin)是從菊科植物水飛薊(Silybum marianum Linn.Gaertn)中提取出的一種黃酮類化合物，具有多種臨床功效，已被多國藥典收錄。水飛薊賓(Silybin或Silibinin)是水飛薊素的4種異構體中含量最高，活性最好的1種，由一分子黃杉素(Taxifolin)和一分子松柏醇(Coniferyl alcohol)通過氧化偶合而成。

目前，人們獲取水飛薊賓的主要手段是從水飛薊種子中提取。然而，該提取工藝復雜，成本較高；水飛薊的生長收到季節和環境的影響，且占用耕地；提取過程中使用有機溶劑等，產品的安全性受到威脅。近年來，有人通過金屬離子(Ag₂O等)催化的方法，以松柏醇和黃杉素為底物合成了水飛薊賓的4種同分異構體。然而，該合成過程依然是在有機溶劑中進行的，且反應時間較長(96h)。

發明內容

為了克服上述問題，本發明提供了一種使用漆酶催化合成水飛薊賓的方法，以漆酶作為催化劑，以黃杉素、松柏醇作為底物，即可實現水飛薊賓的合成，是一種安全高效的方法。

所述的漆酶，為一種銅蛋白，屬于多酚氧化酶，以分子氧為電子受體來催化底物氧化，能夠氧化多種有機和無機化合物。

所述的漆酶來源于漆樹(Rhus vernicifera)，但不僅限于漆樹。

在本發明的一種實施方式中，所述漆酶濃度為0.267U/mL。

在本發明的一種實施方式中，所述底物黃杉素、松柏醇的摩爾比為1：1。

在本發明的一種實施方式中，所述底物黃杉素濃度為2.775×10^-5M。

在本發明的一種實施方式中，所述催化是在適合漆酶催化反應的溫度、pH條件下進行。

在本發明的一種實施方式中，所述催化是在pH 3.0-pH 8.0條件下進行。

在本發明的一種實施方式中，反應體系的pH為6.0，通過添加pH緩沖液控制pH。

在本發明的一種實施方式中，所述催化是在溫度25℃下進行。

在本發明的一種實施方式中，所述催化反應的反應介質為水溶液。

在本發明的一種實施方式中，所述催化使用的反應介質是磷酸鹽緩沖液，以NaH₂PO₄/Na₂HPO₄緩沖液控制pH。

在本發明的一種實施方式中，反應介質是0.2M的pH6的磷酸鹽緩沖液。

所述方法具體是：以pH 6.0的磷酸緩沖液為反應介質，底物松柏醇、黃杉素的摩爾比為1:1，酶的用量為0.267U/mL，在25℃條件下反應。

在本發明的一種實施方式中，松柏醇、黃杉素的摩爾濃度為2.775×10^-5M，酶的終濃度為0.267U/mL，以pH6.0的0.2M磷酸緩沖液為反應介質。在25℃條件下反應1h，水飛薊賓的產量達到0.9694mg/L。反應產物為水飛薊賓的4種同分異構體(水飛薊賓A、異水飛薊賓A、水飛薊賓B和異水飛薊賓B)。

本發明的有益之處：