[發明專利]層析柱硅膠填裝上樣方法

在審

• 申請號: 201510791845.1
• 申請日: 2015-11-17
• 公開（公告）號: CN105457337A
• 公開（公告）日: 2016-04-06
• 發明（設計）人: 徐道禮;徐勝博;雷茂林
• 申請（專利權）人: 重慶臻源紅豆杉發展有限公司
• 主分類號: B01D15/20
• 分類號: B01D15/20;C07D305/14
• 代理公司: 深圳市興科達知識產權代理有限公司 44260
• 代理人: 汪威

技術領域

本發明屬于層析柱技術領域，具體的說，涉及一種層析柱硅膠填裝上樣方法。

背景技術

層析分離是化工和制藥行業常用的目標物分離、純化方法，中藥現代化的其中目標之一就是把中藥的有效成分分離純化，研發出高效、低毒、服用方便的新型藥物制劑，硅膠層析分離是植物提取物中有效活性成分分離純化的主要方法。

硅膠層析分離生產，分離載體硅膠的填裝和上樣是兩個非常關鍵的步驟，直接關系到硅膠層析分離的效果和質量，目前規模化硅膠層析分離生產過程中，分離載體硅膠的填裝和上樣沒有規范化的操作，造成分離質量不穩定，嚴重影響生產。

發明內容

為解決以上技術問題，本發明的目的在于提供一種層析柱硅膠填裝上樣方法，分離的質量穩定，規范化操作，而且操作更加簡單方便。

本發明目的是這樣實現的：

一種層析柱硅膠填裝上樣方法，其關鍵在于按以下步驟進行：

a、配制樣品溶液：向待分離樣品中加入溶劑溶解得到樣品溶液；

b、配制溶劑-硅膠混懸物：向硅膠中加入溶劑；

c、分離準備：關閉層析柱底閥，向層析柱中加入1/3層析柱體積的溶劑，然后向層析柱中緩慢加入溶劑-硅膠混懸物，同時緩慢開啟層析柱底閥，保持加入速率與流出速率相等，同時保持液面高出硅膠面14.5～15.5cm，溶解-硅膠混懸物加入完畢后，關閉層析柱底閥，層析柱靜置沉降；

d、分離提純：開啟層析柱底閥至液面剛好下至硅膠面時關閉，在硅膠面上墊一張直徑略小于柱直徑的濾紙；再將樣品溶液加入層析柱內，開啟層析柱底閥，當溶液下降至硅膠面時，再加入溶劑洗滌層析柱內壁和樣品溶液的容器，洗滌液歸入層析柱后，加入洗脫液開始層析分離提純。

優選地，上述步驟a和d中的溶劑加入體積量≤4％層析柱體積。

優選地，上述步驟b中的溶劑體積與硅膠重量比為3.5mL/g。

有益效果：

本發明一種層析柱硅膠填裝上樣方法，分離的質量穩定，規范化操作，而且操作更加簡單方便。

具體實施方式

含量70％紫杉醇粗品的主要雜質是三尖杉寧堿和7-表紫杉醇，紫杉醇和7-表紫杉醇是同分異構體，紫杉醇和三尖杉寧堿分子結構非常相似，它們之間的層析分離難度較大，以此作為實例，具有一定的代表性。下面結合實施例對本發明作進一步說明。

實施例1：

<1>稱取1000g含量70％的紫杉醇粗品，加3500ml二氯甲烷攪拌溶解完全，得樣品溶液。

<2>稱取35kg200～300目層析硅膠，加23L二氯甲烷溶劑，攪拌均勻，得二氯甲烷-硅膠混懸物。

<3>關閉直徑273mm、高150cm的層析柱底閥，加入溶劑二氯甲烷29L，加入二氯甲烷-硅膠混懸物，開啟層析柱底部閥門，調節閥門開度，保持溶劑液面在硅膠面上15cm左右，二氯甲烷-硅膠混懸物加入完畢，關閉層析柱底閥，讓硅膠柱床靜置沉降12小時。

<4>開啟層析柱底閥，液面下降至硅膠面時，在硅膠面上墊一張直徑略小于層析柱直徑的濾紙，加入樣品溶液，樣品溶液液面下降至硅膠面時，用3L二氯甲烷洗滌柱內壁和燒杯，洗滌液完全進入層析柱后，加洗脫液二氯甲烷-乙酸乙酯-異丙醇混合溶液，開始層析分離。

<5>層析流份分段合并，濃縮，干燥，得紫杉醇主段600g，紫杉醇含量99.15％。

最后需要說明的是，上述描述僅僅為本發明的優選實施例，本領域的普通技術人員在本發明的啟示下，在不違背本發明宗旨及權利要求的前提下，可以做出多種類似的表示，這樣的變換均落入本發明的保護范圍之內。