[發明專利]花葉良姜愈傷再生體系建立的方法

在審

• 申請號: 201510766101.4
• 申請日: 2015-11-11
• 公開（公告）號: CN105409768A
• 公開（公告）日: 2016-03-23
• 發明（設計）人: 林茂;王華新;龔建英;孫利娜;黃欣;李進華;杜鈴;蔣濟剛;鐘程
• 申請（專利權）人: 廣西壯族自治區林業科學研究院;南寧市三塘十里長廊園林花木專業合作社
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京中政聯科專利代理事務所(普通合伙) 11489
• 代理人: 郭曉華

技術領域

本發明屬于園林科學中觀賞植物組培快繁技術，具體是花葉良姜愈傷組織再生體系建立的方法。

背景技術

花葉良姜(學名：Alpiniazerumbet‘Variegata’)又稱花葉艷山姜、彩葉姜、斑紋月桃等，是姜科山姜屬多年生草本植物。花葉良姜葉色艷麗，花姿優美，花香清純，是非常有觀賞價值的觀葉觀花植物，是園林綠化工程不可或缺的素材。隨著“美麗中國”的建設，花葉良姜在園林中的應用日益廣泛、工程用量日益增多。傳統分株繁殖的方法存在增殖系數低的問題，不是高效的繁殖方法，不能滿足市場的需求。所以，需要研究開發更加高效的繁殖方法。

目前，花葉良姜的組織培養主要利用根狀莖和莖尖誘導叢生芽、以芽繁芽的方法進行繁殖，仍存在增殖系數較低的問題。如潘梅.花葉艷山姜莖尖離體快繁技術花葉艷山姜莖尖離體快繁技術[J].熱帶生物學報,2012(3):267-270,以莖尖為外植體誘導叢生芽，增殖倍數為4.0，生根率為93％；秦麗鳳,文清嵐,宋西娟.花葉良姜組培生產與栽培管理技術[J].南方園藝2013，24(5),以花葉良姜塊莖上開始萌發的芽為外植體，經過誘導培養基培養得到叢生芽，再依次經過繼代增殖、誘導生根培養得到花葉良姜組培苗，增殖倍數為3.8倍，生根率為100％；陳玉梅.花葉良姜組培快繁體系建立的探討[J].中國科技信息,2014(12):51-52,以花葉良姜根狀莖為組培外植體，經過初代培養后得到無菌芽，把芽再進行繼代增殖，得到的繼代再經過生根誘導培養，最終得到花葉良姜組培苗，此方法的增殖系數最高為7.03，有效苗率(苗生根率)為62.13％。但是，未見關于花葉良姜通過誘導愈傷組織和分化不定芽的途徑進行植株再生的研究報道。

發明內容

本發明的目的是提供花葉良姜愈傷組織再生體系建立的方法，克服現有組培育苗技術增殖系數低的問題，提高組培育苗增殖系數，降低育苗成本，滿足市場需要。

本發明解決現有技術問題的技術方案如下：

花葉良姜愈傷組織再生體系建立的方法，包括以下步驟：

1)外植體選擇及預處理：選擇成熟、飽滿的當年種子作為外植體，用800倍高錳酸鉀浸種20min后清水沖洗10min，用濃硫酸進行預處理5min后清水沖洗30min；

2)無菌萌發：將預處理的種子用75％乙醇處理1min后無菌水沖洗3次，0.1％升汞處理10min后無菌水沖洗5次,5％次氯酸鈉處理3min后無菌水沖洗5次，接種于萌芽培養基M₀，30天后統計污染率和萌發率；

3)愈傷組織誘導：當植株高1～2cm將根切除，接種于愈傷組織培養基M₁進行愈傷組織誘導,30天后統計誘導率；

4)不定芽分化：將愈傷組織接種于不定芽分化培養基M₂進行不定芽誘導,30天后統計增殖率；

5)生根培養：當不定芽高3～4cm時，接種與生根培養基M₃進行生根培養,30天后統計生根率。

所述的萌芽培養基M₀，其成分是：K₂SO₄800mg/L，MgSO₄·7H₂O350mg/L，KH₂PO₄180mg/L，NH₄NO₃600mg/ml，MnSO₄·4H₂O22.5mg/L，Ca(NO₃)₂·4H₂O556mg/L，FeSO₄·7H₂O27.8mg/L，Na₂EDTA37.3mg/L，ZnSO₄·7H₂O8.6mg/L，H₃BO₃6.2mg/L，CuSO₄·5H₂O0.25mg/L，Na₂MoO₄·2H₂O0.25mg/L，肌醇100mg/L，甘氨酸2.0mg/ml，維生素B11.0mg/L，維生素B60.5mg/L，煙酸0.5mg/L。

所述的愈傷組織誘導培養基M₁，其成分是：M₀+1～2mg/L苯噻隆+0.5～1mg/L2,4-二氯苯氧乙酸。