[發明專利]棉花生長點染色體加倍的方法

在審

• 申請號: 201510764614.1
• 申請日: 2015-11-11
• 公開（公告）號: CN105340538A
• 公開（公告）日: 2016-02-24
• 發明（設計）人: 陳弟;張西嶺;李付廣;張海棠
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院棉花研究所
• 主分類號: A01G1/00
• 分類號: A01G1/00;A01G1/06;A01H1/08
• 代理公司: 北京輕創知識產權代理有限公司 11212
• 代理人: 吳英彬

1.一種棉花生長點染色體加倍的方法，其特征在于，包括將遠緣雜交F1代棉花植株經嫁接進行無性繁殖，對所得植株的接穗采用劈接法進行嫁接以獲得足量待加倍生長點，對待加倍生長點依次進行干旱、修剪及倒立處理，之后將待加倍生長點置于加倍裝置中采用加倍試劑全浸泡進行生長點染色體加倍處理后，用清水噴洗生長點同時對植株澆水，最后進行加倍鑒定。

2.如權利要求1所述的棉花生長點染色體加倍的方法，其特征在于，具體包括如下步驟：

(1)植株無性繁殖：

對準備進行生長點染色體加倍的棉花植株通過嫁接的方式進行無性繁殖，得到植株嫁接苗；

(2)待加倍生長點預備：

對所得植株嫁接苗進行培養管理，選取所得粗壯嫁接活苗的接穗采用劈接法進行嫁接；

(3)待加倍生長點干旱處理：

將莖高大于10cm的粗壯嫁接成活苗進行斷水處理，直至粗壯嫁接苗的接穗初現萎蔫時為止；

(4)修剪處理：

對經干旱處理過的全部萎蔫嫁接苗接穗進行頂端生長點修剪，在保留生長點的同時用小剪刀從生長點開始往下部剪除平展葉及葉柄，修剪至有大于30mm光桿為止；

(5)倒立處理：

將用紙箱制成的圓形擋土板剪出一個直徑20mm的同心圓后，將修剪處理后的嫁接苗莖桿穿套于所述同心圓內，同時，所述圓形擋土板遮擋住營養土袋口，將營養土袋和嫁接苗一并倒立于四方體框架內，并用方木兩側夾托住所述四方體框架，使嫁接苗生長點倒立；

(6)生長點染色體加倍處理：

將經過干旱、修剪及倒立處理后的嫁接苗生長點用加倍裝置套住，該加倍裝置內注有0.5wt％秋水仙堿溶液，所述的加倍裝置包括圓底離心管及一端綁緊所述離心管蓋頸另一端用于纏在其嫁接苗生長點套設入該離心管內的植株莖桿上的毛線，所述的秋水仙堿溶液對所述的嫁接苗生長點完全浸泡6-8小時；

(7)后處理：

卸下所述的加倍裝置，并將經過生長點染色體加倍處理后的嫁接苗從所述的四方體框架上卸下，之后將嫁接苗繼續置于所述的營養土袋內培養，同時用清水噴洗其生長點，并對嫁接苗澆水打破干旱使其正常生長，生長7天后，噴灑營養液促進新芽長出，之后對長出新芽的嫁接苗植株進行隔離管理，并將非加倍生長點處長出的側芽摘除，對加倍生長點進行加倍鑒定。

3.如權利要求2所述的棉花生長點染色體加倍的方法，其特征在于，所述的步驟(2)中嫁接苗進行培養管理：將嫁接苗在愈合期置于密閉的農膜遮陽的低矮小拱棚中，間隔通風，并提前對小拱棚噴藥除菌除蟲，待愈合成活后，移栽到規格為寬14cm、高21cm的大營養袋定植，移栽時砧木全部埋在土中，只留嫁接口及上部接穗部分在土面上，移栽后置遮陽網下生長，加強水肥管理，獲得粗壯苗。

4.如權利要求2所述的棉花生長點染色體加倍的方法，其特征在于，所述的步驟(2)中接穗進行嫁接的方法：選第一片真葉平展的粗壯苗為砧木，切取長度為30mm的粗壯頂芽或側芽生長點為接穗，采用劈接法進行嫁接，其中砧木與接穗嫁接時彼此接觸長度為10-15mm，并加強水肥和防病蟲害管理，保證生長點粗壯生長。

5.如權利要求2所述的棉花生長點染色體加倍的方法，其特征在于，所述的步驟(5)中倒立處理的具體步驟：用規格為3層的紙箱紙制成直徑比營養土袋袋口直徑稍大的圓形擋土板，用剪刀沿著半徑剪至中心并剪出直徑為20mm同心圓，該同心圓用于穿套所述嫁接苗莖桿；之后沿著被剪開的半徑掰開所述圓形擋土板輕輕套在嫁接苗上并遮擋住所述營養土袋袋口；之后將嫁接苗與營養土袋一并倒立在1000mm柱高的四方體框架上，并由兩根方木夾托，使嫁接苗的生長點朝下倒立。

6.如權利要求2所述的棉花生長點染色體加倍的方法，其特征在于，所述的步驟(6)中秋水仙堿溶液的配制：稱取秋水仙堿粉末溶于滅菌的弱堿性水中，得到0.5wt％秋水仙堿溶液，保存在4℃冰箱中備用。