[發明專利]一種電化學納米免疫傳感器及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201510763498.1
• 申請日: 2015-11-10
• 公開（公告）號: CN105301075B
• 公開（公告）日: 2019-03-26
• 發明（設計）人: 耿利華;魯丁強
• 申請（專利權）人: 北京盈盛恒泰科技有限責任公司
• 主分類號: G01N27/30
• 分類號: G01N27/30;G01N27/48;G01N33/573;G01N33/68
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君

本發明提供一種電化學納米免疫傳感器及其制備方法和應用。所述傳感器以海藻酸鈉為橋聯劑將納米金和辣根過氧化物酶固定于電極表面，所述納米金吸附有抗谷胱甘肽硫轉移酶抗體。所述制備方法包括步驟：(1)對電極進行預處理，然后在電極上包被由海藻酸鈉溶液、納米金溶膠和辣根過氧化物酶溶液組成的混合溶液；(2)繼續在電極上包被抗谷胱甘肽硫轉移酶抗體；(3)封閉液封閉后即得。本發明的電化學納米免疫傳感器不受樣品的濁度、顏色的影響，無需對樣品進行純化、富集等預處理，操作簡單，檢測靈敏度高、特異性強，能夠用于對谷胱甘肽硫轉移酶進行快速定量檢測，具有良好的應用前景。

技術領域

本發明涉及生物免疫檢測技術領域，具體涉及一種電化學納米免疫傳感器及其制備方法和應用。

背景技術

GST標簽是來自日本血吸蟲中的谷胱甘肽硫轉移酶蛋白，其結構非常保守。在基因工程中，蛋白質的表達經常用到各種融合蛋白表達系統，其中就包括GST標簽表達體系，其具有蛋白表達產率高、表達產物純化方便以及利于抗體制備等優點，目前已經得到越來越廣泛的應用。用谷胱甘肽硫轉移酶融合表達系統表達外源基因時，對融合表達產物的檢測非常重要。目前常用的檢測谷胱甘肽硫轉移酶標簽蛋白的方法是Western blot和ELIESA，但周期較長且靈敏度不高。因此，研究開發一種快速、靈敏、檢測成本低的檢測方法成為科學家們的強烈需要。

發明內容

本發明的目的是針對目前對谷胱甘肽硫轉移酶檢測不方便、耗時長、檢測成本高等現有技術的缺陷，而提供一種電化學納米免疫傳感器及其制備方法和應用。本發明的電化學納米免疫傳感器不受樣品的濁度、顏色的影響，無需對樣品進行純化、富集等預處理，操作簡單，檢測靈敏度高、穩定性好、特異性強，能夠用于對谷胱甘肽硫轉移酶進行快速定量檢測。

本發明提供下述技術方案解決上述技術問題。

本發明提供的技術方案之一是：一種電化學納米免疫傳感器，所述傳感器以海藻酸鈉為橋聯劑將納米金和辣根過氧化物酶固定于電極表面，所述納米金吸附有抗谷胱甘肽硫轉移酶抗體。

所述抗谷胱甘肽硫轉移酶抗體為本領域常規，其來源和類型均沒有特殊要求，既可以是單克隆抗體，也可以是多克隆抗體，優選單克隆抗體。

所述電極可以是本領域常規所述的各類電極，優選玻碳電極。

本發明提供的技術方案之二是：前述電化學納米免疫傳感器的制備方法，其包括如下步驟：

(1)對電極進行預處理，然后在電極上包被由海藻酸鈉溶液、納米金溶膠和辣根過氧化物酶溶液組成的混合溶液；

(2)繼續在電極上包被抗谷胱甘肽硫轉移酶抗體；

(3)封閉液封閉后即得。

步驟(1)為對電極進行預處理，然后在電極上包被由海藻酸鈉溶液、納米金溶膠和辣根過氧化物酶溶液組成的混合溶液。

其中，所述電極可以是本領域常規所述的各類電極，優選玻碳電極(glassycarbon electrode，GCE)。

如本領域常規，所述包被為將電極置于溶液中進行包被或者將包被溶液滴涂于電極表面。優選地，所述包被為將電極置于由海藻酸鈉溶液、納米金溶膠和辣根過氧化物酶溶液組成的混合溶液中進行包被，或者將由海藻酸鈉溶液、納米金溶膠和辣根過氧化物酶溶液組成的混合溶液滴涂于電極表面。

所述海藻酸鈉(Sodium alginate，SA)溶液優選以如下方法制得：將海藻酸鈉溶于水得到海藻酸鈉溶液，備用。更優選地，將2g海藻酸鈉溶于100mL雙蒸水中，得到2％的海藻酸鈉溶液，備用。