[發明專利]與辣椒抗黃瓜花葉病毒病基因qcmv-2-1連鎖的分子標記及其應用

在審

• 申請號: 201510753246.0
• 申請日: 2015-11-06
• 公開（公告）號: CN105296475A
• 公開（公告）日: 2016-02-03
• 發明（設計）人: 郭廣君;王述彬;劉金兵;刁衛平;戈偉;高長洲
• 申請（專利權）人: 江蘇省農業科學院
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/68
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責任公司 32218
• 代理人: 傅婷婷;徐冬濤

技術領域

本發明屬于分子育種領域，涉及與辣椒抗黃瓜花葉病毒病基因qcmv-2-1連鎖的分子標記及其應用。

背景技術

黃瓜花葉病毒(Cucumbermosaicvirus，CMV)為雀麥花葉病毒科(Bromoviridae)黃瓜花葉病毒屬(Cucumovirus)的典型成員，可引起辣椒嚴重的系統癥狀，導致葉片黃化、扭曲變形、嚴重花葉，損害果實的商品性狀。黃瓜花葉病毒病一般能導致辣椒減產20％～30％，嚴重時可達50％～60％，個別地區甚至絕收，是辣椒最嚴重的病害之一。我國辣椒生產中CMV檢出率最高，是辣椒抗病育種的主攻目標。

傳統育種方法中，選育抗病材料是通過接種鑒定，根據植株的表型進行篩選。該種方法因為接種不充分或發病條件不適宜而影響選擇效率，難以準確、快速的篩選出具有抗病基因的個體植株。此外辣椒抗黃瓜花葉病毒病基因大部分來自野生辣椒，抗病基因常與不良性狀基因緊密連鎖。利用傳統育種方法打破不良連鎖所需群體大、周期長、效率低，而分子標記輔助選擇(MolecularMarker-assistedSelection，MAS)育種可有效的克服傳統育種的缺陷，加速育種進程。

插入/缺失多態性(insertion/deletion,InDel)是由于等位基因位點處的DNA序列在不同個體間發生了核苷酸片段的插入/缺失而產生的長度多態性變異。根據目標位點兩側的序列設計特異引物進行PCR擴增，擴增片段的長度多態性即是InDel標記。在整個基因組中，Indel標記的多態性頻率僅次于SNP標記，遠高于SSR標記。InDel標記多態性可通過聚合酶鏈式反應(PCR)和瓊脂糖凝膠電泳或非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳等簡單的步驟達到基因分型的目的。InDel標記為共顯性標記，具有較好的穩定性和較為豐富的多態性，廣泛應用于高分辨率圖譜構建、關聯分析、基因定位和目標性狀分子標記篩選等領域。本發明采用QTL-Seq方法和Indel標記技術，篩選與黃瓜花葉病毒病抗性基因qcmv-2-1緊密連鎖的標記，以實現黃瓜花葉病毒病抗性的分子標記輔助育種，加速我國辣椒抗黃瓜花葉病毒病新品種的選育進程。

發明內容

本發明的目的是針對現有技術的上述不足，提供一種與辣椒抗黃瓜花葉病毒病基因qcmv-2-1連鎖的分子標記。

本發明的另一目的是提供與辣椒黃瓜花葉病毒病抗性基因qcmv-2-1連鎖的分子標記的引物對。

本發明的又一目的是提供該分子標記及其引物對的應用。

本發明的目的可通過以下技術方案實現：

一種與辣椒黃瓜花葉病毒病抗性基因qcmv-2-1連鎖的分子標記，通過引物對InDel-2-134F/InDel-2-134R擴增辣椒基因組DNA，獲得的230bp的擴增片段為所述的與辣椒黃瓜花葉病毒病抗性基因qcmv-2-1連鎖的分子標記；其中，InDel-2-134F序列如SEQIDNO.1所示，InDel-2-134R序列如SEQIDNO.2所示。

與辣椒黃瓜花葉病毒病抗性基因qcmv-2-1連鎖的分子標記的引物對InDel-2-134F/InDel-2-134R，InDel-2-134F序列如SEQIDNO.1所示，InDel-2-134R序列如SEQIDNO.2所示。

辣椒黃瓜花葉病毒病抗性基因qcmv-2-1的分子標記方法，用本發明所述的引物對InDel-2-134F/InDel-2-134RPCR擴增待檢辣椒基因組DNA，并檢測擴增產物，如果擴增出230bp的擴增片段，則標志著待檢辣椒中存在辣椒抗黃瓜花葉病毒病基因qcmv-2-1，待檢辣椒為黃瓜花葉病毒病抗病植株。

本發明所述的分子標記在鑒定辣椒種質資源中黃瓜花葉病毒病抗性基因qcmv-2-1中的應用。

本發明所述的分子標記在篩選抗黃瓜花葉病毒病的辣椒中的應用。

本發明所述的分子標記在培育抗黃瓜花葉病毒病辣椒的分子育種中的應用。

本發明所述的引物對InDel-2-134F/InDel-2-134R在鑒定辣椒種質資源中黃瓜花葉病毒病抗性基因qcmv-2-1中的應用。

本發明所述的引物對InDel-2-134F/InDel-2-134R在篩選抗黃瓜花葉病毒病辣椒中的應用。

本發明所述的引物對InDel-2-134F/InDel-2-134R在培育抗黃瓜花葉病毒病辣椒的分子育種中的應用。