[發明專利]多倍體金線蓮品種的培育方法

在審

• 申請號: 201510749602.1
• 申請日: 2015-11-06
• 公開（公告）號: CN105191807A
• 公開（公告）日: 2015-12-30
• 發明（設計）人: 蘇鈺琴;莫燕蘭;盤飛蘭;楊杰花;韋祥意;羅文正;張華英
• 申請（專利權）人: 廣西相成生物科技有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙) 11371
• 代理人: 欒波

技術領域

本發明涉及植物培育領域，具體而言，涉及多倍體金線蓮品種的培育方法。

背景技術

金線蓮是蘭科(Orchidaceae)開唇蘭屬(Anoectochilus)的全草，別名金線蘭、金絲草。是民間使用較廣的一種傳統珍貴藥材，具有清熱解毒、祛風利濕、滋陰潤肺、降血壓、平肝等功效。民間用于治療肺結核、肺熱咳嗽、風濕性關節炎、小兒驚風、跌打損傷、蛇傷等多種疾病，均有很好療效。其株型小巧，葉型美觀，葉脈金黃色網狀排列，具有極高的觀賞價值。近年來，金線蓮用于治療高血壓、糖尿病及腫瘤等疑難病癥方面，日益引起醫藥界的重視。民間稱其為“神藥，臺灣稱為“藥王”。目前金線蓮在臺灣和東南亞地區的需求量很大，它在國內市場的售價已達2000元人民幣/kg。

由于金線蓮對生態環境要求嚴格，自然繁殖和生長緩慢，加上人類大量采集，藥源瀕于枯竭，人工種植成為發展金線蓮產業的必然選擇。但是，采用種子直播、分根繁殖、扦插繁殖等需時較長，繁殖倍率不高；金線蓮株型小，導致種植者的效益不夠顯著。

有鑒于此，特提出本發明。

發明內容

本發明的目的在于提供多倍體金線蓮品種的培育方法，該方法采用安磺靈對金線蓮的原球莖進行處理，使其染色體加倍，安全性高；得到的多倍體金線蓮植株比二倍體親本成倍增大，莖稈粗壯，葉片厚實，并且根、莖、葉的有效成分明顯高于二倍體親本。

為了實現本發明的上述目的，特采用以下技術方案：

多倍體金線蓮品種的培育方法，包括以下步驟：

(a)、將二倍體金線蓮的種子培養得到原球莖；

(b)、將所述原球莖浸泡在5-15μmol/L安磺靈溶液中浸泡處理10-36h；

(c)、浸泡后的原球莖繼續培養，得到叢生芽；

(d)、所述叢生芽分株后轉入生根培養基中培養得到根莖葉完整的組培苗；

(e)、所述組培苗經篩選得到多倍體植株。

本發明提供的多倍體金線蓮品種的培育方法，選用金線蓮原球莖作為誘導材料，原球莖具有很強的分生能力，安磺靈溶液可抑制細胞有絲分裂，使細胞中的染色體加倍；本發明以特定濃度的安磺靈溶液對原球莖浸泡特定的時間，經過培養后得到的植株中，篩選即可得到多倍體金線蓮植株，經大量試驗驗證，誘導率在43.2％-44.8％之間，得到的多倍體金線蓮植株性狀優良。

另外，本發明特定選用安磺靈，安磺靈毒性小，且性質穩定；而秋水仙素作為常用的染色體加倍劑，有劇毒，對操作人員容易造成傷害。

優選地，步驟(e)中，通過染色體檢測篩選出多倍體植株。

優選地，在步驟(a)和步驟(c)中，所述培養均采用第一培養基進行；

所述第一培養基為：MS培養基中含有BA0.8-1.2mg/L、KT0.7-1.2mg/L、NAA0.05-0.15mg/L、蔗糖20-35g/L、瓊脂4.5-8g/L、香蕉17-25g/L。

第一培養基營養豐富，利于金線蓮種子及其原球莖的生長。

更優選地，所述第一培養基為：MS培養基中含有BA1.0mg/L、KT1.0mg/L、NAA0.1mg/L、蔗糖30g/L、瓊脂5g/L、香蕉20g/L。

為了培養得到的原球莖處于更好的狀態，提高誘導染色體加倍的效果，優選地，在步驟(a)中，所述培養的時間為27-40天，優選為28-32天。

為了達到更好的誘導效果，進一步地，在步驟(b)中，所述安磺靈溶液的濃度為8-10μmol/L，浸泡處理15-30h。

為了提高生根率，優選地，所述生根培養基為：MS培養基中含有NAA0.4-0.8mg/L、活性炭0.4-0.6g/L、香蕉18-25g/L。

更優選地，所述生根培養基為：MS培養基中含有NAA0.5mg/L、活性炭0.5g/L、香蕉20g/L。

進一步地，在步驟(d)中，生根培養基中培養的時間為38-45天，得到完整的植株。

進一步地，步驟(a)、(b)、(c)、(d)、(e)均在無菌條件下進行。

優選地，步驟(a)、(c)和(d)中的培養條件均為：溫度為25±2℃，濕度為58-63％，光照強度為1500-2000xl，光照時間為9-12h/天。

優選地，在步驟(b)中，所述原球莖在浸泡安磺靈溶液之前，先進行暗培養3-5天。通過暗培養增大細胞的通透性，使誘導劑更容易滲透到細胞里面，提高誘導率。

另外，本發明中的MS培養基的配方如表1所示。

表1MS培養基具體成分