[發明專利]中藥虎杖提取液中分離純化白藜蘆醇的方法

在審

• 申請號: 201510747682.7
• 申請日: 2015-11-06
• 公開（公告）號: CN105420293A
• 公開（公告）日: 2016-03-23
• 發明（設計）人: 湯華釗;陳良
• 申請（專利權）人: 貴州天豪民族藥業有限公司
• 主分類號: C12P7/22
• 分類號: C12P7/22;C07C37/70;C07C39/21
• 代理公司: 重慶強大凱創專利代理事務所(普通合伙) 50217
• 代理人: 黃書凱

技術領域

本發明涉及植物有效成分提取領域，具體涉及一種從中藥虎杖中提取白藜蘆醇的方法。

背景技術

廣而周知喝葡萄酒有益健康，現代研究表明，這是因為葡萄酒中含有高效抗氧化劑，而白藜蘆醇就是其中之一。葡萄在生長過程中，為防止灰色霉菌感染而產生了一種植物抗霉素，該抗霉素就是白藜蘆醇，主要存在于葡萄的皮中，是一種生物性很強的天然多酚類物質，多用作腫瘤、心腦血管疾病等的化學預防劑。除此之外，白藜蘆醇還存在與蓼科植物虎杖的根和根莖、豆科花生的紅衣和仁等植物中，其中，虎杖中白藜蘆醇含量最高。

白藜蘆醇在虎杖藥材中主要以苷的形式存在，少量以游離的白藜蘆醇并存。研究發現，白藜蘆醇的糖苷衍生物虎杖苷和白藜蘆醇具有相似的藥理作用，且在虎杖中的含量大大超過白藜蘆醇，但它的生物活性和價值卻遠不如白藜蘆醇。所以，根據目前藜蘆醇在市場上需求量的增大，本領域內大多學者研究從植物中提取白藜蘆醇的方法。

檢索發現，關于“從虎杖中提取白藜蘆醇”方面的文獻和專利已有報道。中國專利“虎杖苷和白藜蘆醇的新制備方法”（ZL200310112538.3）公開的是采用聚酰胺層析法分離純化白藜蘆醇；中國專利“一種從中藥虎杖中制備白藜蘆醇的工藝”（CN201210344092.6）將虎杖先用復合酶發酵再提取，再用大孔樹脂分離純化白藜蘆醇。雖然這些現有技術嘗試了各種不同的分離、純化的方法，有些方法需要特殊或復雜的設備，生產率低，不容易規模化生產；有的工藝比較復雜，且目前能獲得白藜蘆醇的純度最高僅有86%。然而采用中壓氧化鋁層析柱進行洗脫、分離，并結合超臨界CO₂沉析技術進行精致純化白藜蘆醇的方法尚未見報道。

發明內容

本發明的目的是解決上述現有技術工藝復雜，生產率低，產品純度不高等問題，提供一種從中藥虎杖提取液中分離純化白藜蘆醇的方法，該方法制得的白藜蘆醇純度可達95～98%。

為了解決上述技術問題，本發明提供如下技術方案：中藥虎杖提取液中分離純化白藜蘆醇的方法，步驟包括發酵、提取、萃取、分離、純化和干燥，具體步驟如下：

發酵：將中藥虎杖粉末放入發酵池中，使用培養基進行發酵5～7天，使虎杖苷轉化為白藜蘆醇；

提取：將步驟1中的虎杖粉末連同發酵所得的發酵液轉移至提取爐中，并加入濃度為80%的甲醇回流提取3次；每次加入甲醇的體積為發酵液體積的3倍，每次提取后過濾，合并3次過濾所得濾液，并回收甲醇；

向回收甲醇后的提取液中加入蒸餾水，攪拌，冷藏、靜置24h后，過濾，獲取濾液；所加蒸餾水的體積為提取液體積的6倍；

離心：將步驟3所得濾液進行離心處理，取上清液；

初步萃取：上清液中加入與上清液等體積的乙酸乙酯萃取，萃取3次，合并3次萃取后的乙酸乙酯萃取層；干燥回收乙酸乙酯后所剩殘留液，制得白藜蘆醇粗品；

洗脫分離：加水溶解白藜蘆醇粗品制得上樣液；上樣液上樣于中壓氧化鋁層析柱，進行三次洗脫分離：第一次采用蒸餾水洗脫，第二次用濃度為40～55%乙醇洗脫，第三次采用濃度為70～95%的乙醇洗脫；收集第三次的洗脫液，回收乙醇后進行濃縮，形成濃縮液；

精致純化：使用超臨界CO₂萃取儀，對步驟6中獲得的濃縮液進行沉析分離；超臨界CO₂萃取儀的壓力為17～20MPa、溫度為70～80℃，萃取時間在30～40min；

收集沉析產物，干燥，制得白藜蘆醇。

本發明的有益效果為：本方法通過分離前的離心處理、初步萃取、洗脫分離步驟，去除了提取液中的顆粒狀雜質以及極性較大的其它化學成分；利用中壓氧化鋁層析柱進行三次洗脫分離，達到梯度洗脫的效果，去除制得的上清液中依然可能存在的極性較大和中等極性的化學成分，分離出極性相對較小的白藜蘆醇成分。

另外，本方法還引入了超臨界CO₂對白藜蘆醇進行精致純化，與現有技術中僅使用有機溶劑萃取相比，使用超臨界CO₂流體作為溶劑，在分子間引力作用下集聚于溶質分子的周圍形成包囊層。當溶解了溶質的超臨界CO₂流體達到分離釜時，溶質與CO₂迅速分離，溶質沉降在分離釜中形成萃取物，超臨界CO₂流體便能將第三次洗脫收集的洗脫液中殘留的溶劑去除，減少溶劑的殘留，達到進一步凈化的目的，獲得了純度達95～98%的白藜蘆醇產品。另外，因為二氧化碳臨界點的物理參數值小，系統操作較為溫和，故本發明提供的方法還具有純凈安全、能保持白藜蘆醇生物活性的優點。