[發明專利]微生物轉化虎杖苷制備白藜蘆醇的方法

在審

• 申請號: 201510747647.5
• 申請日: 2015-11-06
• 公開（公告）號: CN105296545A
• 公開（公告）日: 2016-02-03
• 發明（設計）人: 湯華釗;陳良
• 申請（專利權）人: 貴州天豪民族藥業有限公司
• 主分類號: C12P7/22
• 分類號: C12P7/22;C07C39/21;C07C37/70
• 代理公司: 重慶強大凱創專利代理事務所(普通合伙) 50217
• 代理人: 黃書凱

技術領域

本發明涉及天然產物化學技術領域，具體涉及一種微生物轉化虎杖苷制備白藜蘆醇的方法。

背景技術

廣而周知喝葡萄酒有益健康，現代研究表明，這是因為葡萄酒中含有高效抗氧化劑，而白藜蘆醇就是其中之一。葡萄在生長過程中，為防止灰色霉菌感染而產生了一種植物抗霉素，該抗霉素就是白藜蘆醇，主要存在于葡萄的皮中，是一種生物性很強的天然多酚類物質，多用作腫瘤、心腦血管疾病等的化學預防劑。除此之外，白藜蘆醇還存在與蓼科植物虎杖的根和根莖、豆科花生的紅衣和仁等植物中，其中，虎杖中白藜蘆醇含量最高。

白藜蘆醇在虎杖藥材中主要以苷的形式存在，少量以游離的白藜蘆醇并存。研究發現，白藜蘆醇的糖苷衍生物虎杖苷和白藜蘆醇具有相似的藥理作用，且在虎杖中的含量大大超過白藜蘆醇，但它的生物活性和價值卻遠不如白藜蘆醇。所以，根據目前藜蘆醇在市場上需求量的增大，本領域內大多學者研究從植物中提取白藜蘆醇的方法。

檢索發現，關于“從虎杖中提取白藜蘆醇”方面的文獻和專利已有報道。中國專利“虎杖苷和白藜蘆醇的新制備方法”（ZL200310112538.3）公開的是采用聚酰胺層析法分離純化白藜蘆醇。但是因該方法是將虎杖中的虎杖苷和白藜蘆醇分別提取，不能在提取的同時將虎杖中的虎杖苷轉化成白藜蘆醇，所以采用該方法提取白藜蘆醇的獲得率低；中國專利“一種從中藥虎杖中制備白藜蘆醇的工藝”（CN201210344092.6）將虎杖先用復合酶發酵再提取，再用大孔樹脂分離純化白藜蘆醇。該方法制得的白藜蘆醇產品純度可達65%以上。但該方法的虎杖中虎杖苷的轉化率不高，從而白藜蘆醇的獲得率低。

發明內容

針對上述存在的技術問題，本發明提供一種中藥虎杖中提取白藜蘆醇的方法，該方法有助于促進虎杖藥材中的虎杖苷轉化為白藜蘆醇，進而提高白藜蘆醇獲得率。

為了解決上述技術問題，本發明提供如下技術方案：微生物轉化虎杖苷制備白藜蘆醇的方法，步驟包括粉碎、發酵、提取、分離、干燥，具體步驟如下：

1）液體培養基的制備：300g土豆削皮后切成丁狀或片狀，放入1500mL純凈水中，煮沸30min，過濾取濾液，于濾液中加入虎杖內生菌虎杖內生菌33～48株、葡萄糖15～20g、硝銨酸15～20g、蛋白胨5～10g，酒曲100～150g，攪拌混合均勻，調節pH為5；

2）粉碎：粉碎虎杖飲片，制得虎杖粉末；

3）發酵：稱取80～100目篩之間的虎杖粉末500g放入發酵容器中，將步驟1所制備培養基倒入發酵容器中，攪拌充分混勻，發酵溫度35～40℃，發酵5～8天；

4）提取：向步驟3所得虎杖粉末連同發酵液中加入8倍體積濃度為70%的甲醇回流提取3次；每次趁熱過濾，合并3提取所得到的提取液；

5）分離：將步驟4所得的提取液進行離心處理，取上清液，將上清液上樣于中壓氧化鋁層析柱，依次采用35%、65%、95%的乙醇進行梯度洗脫，收集濃度為95%的乙醇洗脫液，并回收乙醇；

6）干燥：干燥步驟5中收集的洗脫液，制得白藜蘆醇。

本發明的有益效果：本發明通過實驗研究，采用了虎杖內生菌進行發酵，有助于將虎杖中存在的虎杖苷轉化成白藜蘆醇。加入酒曲作是滿足發酵的基本條件，利用酒曲中的營養成分，如糖分、淀粉酶等，補充虎杖內生菌生長繁殖的營養及能量來源，從而為虎杖內生菌的生長提供營養基礎，一方面可時虎杖內生菌的活性增強，提高虎杖內生菌高效、快速地將虎杖苷轉化為白藜蘆醇的能力；另一方面可使虎杖內生菌持續繁殖，不斷補充虎杖內生菌，持續作用于虎杖苷，促進虎杖中的虎杖苷轉化為白藜蘆醇，使白藜蘆醇的獲得率達95%以上。另外，控制加入的虎杖內生菌和酒曲的用量，避免發酵過度導致虎杖藥材的腐敗，造成白藜蘆醇的獲得率降低的情況。

進一步，步驟1所述虎杖內生菌為40株、葡萄糖為20g、硝銨酸為20g、蛋白胨為10g，酒曲為150g；步驟3所述發酵溫度為35℃，發酵6天。本方案作為優化方案，通過多組對照實驗，得出500g虎杖藥材中，虎杖苷轉化為白藜蘆醇效果最佳，最終白藜蘆醇的獲得率達98.4%。

具體實施方式

下面結合具體實施例對本發明技術方案作進一步說明：

實施例1：

微生物轉化虎杖苷制備白藜蘆醇的方法，步驟包括粉碎、發酵、提取、分離、干燥，微生物轉化虎杖苷制備白藜蘆醇的方法，具體步驟如下：