[發明專利]流式液相芯片急性高原病纖溶酶原激活抑制物-1基因rs1799889位點檢測試劑盒有效

申請號：	201510740658.0	申請日：	2015-11-04
公開（公告）號：	CN105219872A	公開（公告）日：	2016-01-06
發明（設計）人：	吳麗娟;吳艾霖;熊怡淞;劉毓剛;但剛	申請（專利權）人：	吳艾霖
主分類號：	C12Q1/68	分類號：	C12Q1/68
代理公司：	成都頂峰專利事務所(普通合伙) 51224	代理人：	趙正寅
地址：	636600 四川省巴***	國省代碼：	四川;51
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摘要：
搜索關鍵詞：	流式液相芯片急性高原病纖溶酶原激活抑制基因 rs1799889 檢測試劑盒
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【說明書】：

技術領域

本發明涉及人類基因診斷試劑盒，采用流式熒光雜交法定性檢測急性高原病易感基因中的SNP位點。適用于臨床急性高原病易感基因的預測診斷，還可用于高原適應人群和AMS患者基因組檢測。

背景技術

青藏高原地域遼闊、物產豐富，蘊含著巨大的經濟發展潛力；青藏高原地處祖國西南邊睡，是重要的天然屏障，軍事地理位置重要。但高原自然生存環境惡劣，在海拔3000米高原，大氣壓降至537mmHg，僅為海平面的70%，大氣氧分壓為103mmHg，肺泡氣氧分壓為62mmHg，高原缺氧導致機體勞動能力明顯降低，在海拔4500米地區，人的體力只有平原的60%。高原特殊的環境因素可導致高原病的發生，急性高原病(AcutemountainsieknessAMS)最為常見，危害也最大。流行病學調查顯示，AMS多發生于海拔2500米以上的高原，而我國海拔3000米以上的高原就占國土面積的1/6，常住人口約6000多萬。目前AMS已經成為我國高原地區的重大公共衛生問題，嚴重阻礙著當地經濟、社會及各項事業的發展。由于AMS發展迅速，后果嚴重，目前又缺乏非常有效的治療措施，因此，尋找有效的預防措施顯得尤為迫切。AMS是一種多基因疾病，是高原低氧的環境因素和許多微效致病基因共同作用的結果。大量研究表明，誘導AMS形成的易感基因產物在AMS患者和高原習服人群之間的表達存在顯著性差異。如果在進入高原之前，通過遺傳標記的檢測，將攜帶這種易感基因型的個體篩檢出來，避免其暴露于高原低氧環境，就能有效預防AMS的發生。但現有的實驗室檢測方法均不能進行易感基因型檢測。總之，研發急性高原病易感基因的預測診斷試劑盒仍然是人們面對的挑戰之一。

流式液相芯片技術又稱流式熒光技術或懸浮陣列流式熒光技術，其原理是將熒光標記后的單細胞（或顆粒）懸液隨鞘液進入流動室，壓力迫使鞘液包裹的液滴包含單一細胞或顆粒垂直通過檢測區。熒光標記的細胞或顆粒在激光激發下發出熒光，根據其本身標記的熒光和激發后發出的熒光綜合分析進行檢測。其在小樣本、高通量、操作簡便、快速準確、敏感度、特異度高等方面優于傳統的分析方法，而且其所有反應均在液相中進行，保持天然構象，有利于探針和待測物充分反應，目前已廣泛用于各類核酸及蛋白檢測，如基因分型、抗原/抗體檢測、感染性疾病診斷等，其中HPV檢測及分型試劑盒、呼吸道病毒檢測試劑盒、細胞因子檢測試劑盒、腫瘤標志物檢測試劑盒等已經在美國和中國經FDA及SFDA批準用于臨床檢測。

發明內容

本發明的目的主要是提供一種高特異度、靈敏度，且具有同時檢測多個樣本、多個指標能力的試劑盒。

本發明通過下述技術方案實現：

流式液相芯片急性高原病纖溶酶原激活抑制物-1基因rs1799889位點檢測試劑盒，該試劑盒包含特異性熒光微球交聯探針微球雜交液、特異性PCR引物混合液、預混液、藻紅蛋白熒光標記鏈霉親和素（SA-PE）；

其中，特異性熒光微球交聯探針及特異性PCR引物和探針序列如下：

P-F5-2：5'-AGAGTCTGGACACGTGGGTGA-3'；

P-F6-2：5'-AGAGTCTGGACACGTGGTGA-3'；

P-R0409：5'-AGCCACGTGATTGTCTAGGTT-3'；

P-P4：5'-AACAGAGGACTCTTGGTCTTTCC-3'。

進一步地，所述預混液由4XBuffer、dNTPs、TaqPolymerase組成。

具體地，預混液的用量為：10μl，特異性PCR引物混合液的用量為：2μl。

另外，所述試劑盒還包含ddH₂O。具體地，ddH₂O的用量為：6μl。在進行檢測時，待檢DNA的用量為：2μl。