[發明專利]分泌T-2毒素單克隆抗體的雜交瘤細胞株

有效

• 申請號: 201510740455.1
• 申請日: 2015-11-02
• 公開（公告）號: CN105255838B
• 公開（公告）日: 2018-09-25
• 發明（設計）人: 李蓉;王勇;吳振興;馮雪雅;張靜;王雄;果旗
• 申請（專利權）人: 中山出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術中心;中華人民共和國中山出入境檢驗檢疫局;山東出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術中心;北京中檢維康生物技術有限公司
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C07K16/14;B01J20/24;B01J20/281;B01D15/38;C07D493/10;G01N33/577;C12R1/91
• 代理公司: 成都高遠知識產權代理事務所(普通合伙) 51222
• 代理人: 張娟

本發明提供了一種分泌T?2毒素單克隆抗體的雜交瘤細胞株，還提供了該細胞分泌的T?2毒素單抗。本發明提供的單抗，其腹水效價比達到1:50000，優于現有的單抗。同時，該單抗與HT?2毒素的交叉反應達到92.8％，與其他多種抗原的交叉反應低于0.1％。包含該單抗的免疫親和柱?液相色譜法，可以同時高效分離提取出樣品中的T?2毒素與HT?2毒素，準確、經濟、有效。

技術領域

本發明涉及一種分泌T-2毒素單克隆抗體的雜交瘤細胞株，還涉及該細胞株分泌的T-2毒素單克隆抗體，包含該抗體的免疫吸附劑、免疫親和柱、試劑盒，以及利用該免疫親和柱提取純化T-2毒素和HT-2毒素的方法。

背景技術

T-2毒素和HT-2毒素是由多種真菌，主要是三線鐮刀菌產生的單端孢霉烯族化合物(trichothecenes，TS)，HT-2毒素為T-2毒素的代謝產物。它們廣泛分布于自然界，是常見的污染田間作物和庫存谷物的主要毒素，對人、畜危害較大。T-2和HT-2毒素主要作用于細胞分裂旺盛的組織器官，如胸腺、骨髓、肝、脾、淋巴結、生殖腺及胃腸粘膜等，抑制這些器官細胞蛋白質和DNA合成。此外，還發現該毒素可引起淋巴細胞中DNA單鏈的斷裂。T-2和HT-2毒素還可作用于氧化磷酸化的多個部位而引起線粒體呼吸抑制。1973年聯合國糧農組織(FAQ)和世界衛生組織(WHO)在日內瓦召開的聯席會議上，把這類毒素同黃曲霉素一樣作為自然存在的最危險的食品污染源。

目前，T-2毒素、HT-2毒素的檢測方法主要有薄層層析法、酶聯免疫法(ELISA)。

薄層層析法，要接觸大量的標準品，不利于實驗者的健康，而且靈敏度很低。酶聯免疫法，只適用于定性檢測，很容易出現假陽性和假陰性的現象。而免疫親和層析-液相色譜法是通過免疫親和層析預處理樣品分離提取待檢物質，再用液相色譜法檢測的方法，其經濟、快捷、精確、安全，但是制備得到分離提取待檢物質的免疫親和層析柱卻并非易事，最為關鍵的地方在于尋找同時有效結合T-2毒素、HT-2毒素的抗體。

王雄等人(抗T-2毒素單克隆抗體的制備及鑒定，中國衛生檢驗雜志，2010年2月，20(2)：301-304)報道了一種T-2毒素的單抗。盡管該單抗與黃曲霉素無交叉反應，但是其與HT-2毒素的交叉反應為65.9％。因此，用于免疫親和層析時，該抗體可以有效提取T-2毒素，但無法有效提取HT-2毒素。同時，該單抗的效價僅為1:12000，與T-2毒素的結合力不強，容易解離，導致最終的檢測結果不準確。

因此，目前需要一種與其他毒素不發生交叉反應，效價高，并且可以同時有效提取T-2毒素與HT-2毒素的抗體。

發明內容

為解決上述問題，本發明提供了一種雜交瘤細胞株，該雜交瘤細胞株是中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏的編號為CGMCC NO.11181的雜交瘤細胞株。

本發明雜交瘤細胞株，命名為抗T2毒素、HT-2毒素單克隆抗體細胞，于2015年8月21日保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，其簡稱為CGMCC，其地址為：北京市朝陽區北辰西路1號院3號，其保藏號為：CGMCC NO.11181。

本發明還提供了一種T-2毒素單克隆抗體，該單克隆抗體是由上述的雜交瘤細胞株制備得到的。

本發明還提供了該免疫吸附劑包括固相載體和抗體，所述抗體包括本發明所述的單克隆抗體。

優選地，所述抗體還包括下述單克隆抗體中的任一種或多種：

由中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏的編號為CGMCC NO.5504的雜交瘤細胞株制備得到的單克隆抗體；

由中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏的編號為CGMCC NO.5505的雜交瘤細胞株制備得到的單克隆抗體；