[發(fā)明專利]一種利用東方醋桿菌生產(chǎn)黃芪多糖的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510735138.0
• 申請(qǐng)日: 2015-11-03
• 公開（公告）號(hào): CN105420144B
• 公開（公告）日: 2019-03-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 郭建釗;梁劍平;陶蕾;江紅格;武曉娜;連戰(zhàn)勝;李春慧;朱永喜;董運(yùn)龍;柴瑞紅;孫美鶴
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 許昌市天源生物科技股份有限公司
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;C12P19/04;C12R1/02
• 代理公司: 北京科億知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11350
• 代理人: 湯東鳳

一種利用東方醋桿菌生產(chǎn)黃芪多糖的方法，包括以下步驟：（1）黃芪多糖的發(fā)酵培養(yǎng)基的制備；（2）MRS肉湯培養(yǎng)基的制備；（3）東方醋桿菌的擴(kuò)大培養(yǎng)；（4）發(fā)酵反應(yīng)；（5）分離與測(cè)定。本發(fā)明提供一種經(jīng)濟(jì)、高效的生產(chǎn)黃芪多糖的方法，本方法所用發(fā)酵原料價(jià)格低廉、易采購(gòu)，發(fā)酵過(guò)程簡(jiǎn)單易控，對(duì)發(fā)酵設(shè)備及生產(chǎn)條件無(wú)特殊要求，常規(guī)發(fā)酵工廠的設(shè)備及生產(chǎn)條件即可生產(chǎn)，較易實(shí)現(xiàn)工業(yè)化大生產(chǎn)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及黃芪多糖的生產(chǎn)方法領(lǐng)域，具體涉及一種利用東方醋桿菌生產(chǎn)黃芪多糖的方法。

背景技術(shù)

黃芪來(lái)自于豆科植物膜莢黃芪或蒙古黃芪的干燥根，是臨床常用的中藥，其主要成分黃芪多糖具有提高免疫力﹑抗病毒﹑抗菌﹑抗氧化﹑調(diào)節(jié)血糖﹑護(hù)肝保腎等多種藥效作用。現(xiàn)有技術(shù)中常用的黃芪多糖的提取方法主要有：水提醇沉法、微波提取法、堿浸提法、酶法提取法、超濾法和超聲提取等，其中水提醇沉法應(yīng)用最廣，然而這些從黃芪中直接提取黃芪多糖的方法存在提取率低﹑穩(wěn)定性差﹑純化難度大﹑操作步驟復(fù)雜﹑周期長(zhǎng)等問題。通過(guò)微生物發(fā)酵黃芪，不僅可以提高黃芪多糖的得率，同時(shí)在發(fā)酵過(guò)程中伴隨的某些成分的分解或轉(zhuǎn)化可能生成影響黃芪藥理作用的新藥有效成分，達(dá)到增效減毒的功能。

微生物轉(zhuǎn)化法生產(chǎn)黃芪多糖的其中一個(gè)關(guān)鍵問題是菌種的選擇，本發(fā)明利用了一種全新的東方醋桿菌，通過(guò)優(yōu)化得出其最佳的生產(chǎn)條件及發(fā)酵產(chǎn)生黃芪多糖的最佳條件。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決上述問題，本發(fā)明提供一種利用東方醋桿菌生產(chǎn)黃芪多糖的方法。

本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：

一種利用東方醋桿菌生產(chǎn)黃芪多糖的方法，包括以下步驟：

（1）黃芪多糖的發(fā)酵培養(yǎng)基的制備：稱量魚肉蛋白胨5份、乳糖10份、酵母浸膏5份、磷酸氫二鉀2.5份、磷酸二氫鉀2.5份、黃芪粉80份和水1000份，加入500ml的三角瓶中，用棉塞塞住三角瓶后放入殺菌鍋中滅菌，殺菌鍋溫度為121℃，滅菌20min；

（2）MRS肉湯培養(yǎng)基的制備：稱量酪蛋白酶消化物10份，牛肉膏粉10份，酵母膏粉4份，檸檬酸三銨2份，乙酸鈉5份，七水合硫酸鎂0.2份，四水合硫酸錳0.05份，磷酸二氫鉀2份，葡萄糖2份，吐溫-80 1份，水1000份，將上述成分加入水中，加熱溶解，校正pH為5.7±0.2，分裝在500ml的三角瓶中，用棉塞塞住三角瓶后放入殺菌鍋中，殺菌鍋溫度為121℃，滅菌20min；

（3）東方醋桿菌的擴(kuò)大培養(yǎng)：將東方醋桿菌接入MRS肉湯培養(yǎng)基進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)；

（4）發(fā)酵反應(yīng)：將擴(kuò)大培養(yǎng)后的東方醋桿菌接入黃芪多糖的發(fā)酵培養(yǎng)基中，接種量占發(fā)酵總體積的1%-3%，黃芪用量為8%，將盛有發(fā)酵培養(yǎng)基和東方醋桿菌的三角瓶放入搖床中發(fā)酵，反應(yīng)48h-96h，初始pH為6.5；

（5）分離與測(cè)定：發(fā)酵完畢后，將三角瓶中的混合液倒入離心杯，然后放入離心機(jī)中離心，離心結(jié)束后，取上清液置于4℃冰箱保存?zhèn)溆茫恋聿糠炙蠛笤匐x心，將兩次離心的上清液合并、濃縮后測(cè)量黃芪多糖的含量。

所述步驟（1）中黃芪粉是將潔凈的黃芪片粉碎后過(guò)5號(hào)藥篩制備而成的。

所述步驟（3）中擴(kuò)大培養(yǎng)的的溫度為37℃，初始pH為5.7±0.2，生長(zhǎng)周期為24-32h。

所述步驟（4）中東方醋桿菌的菌液濃度為2×10⁹-3×10⁹個(gè)/ml。

所述步驟（4）中搖床的溫度為27℃-37℃，轉(zhuǎn)速為80-100r/min。

所述步驟（5）中離心機(jī)的轉(zhuǎn)速為1500r/min。

所述步驟（5）中測(cè)量黃芪多糖的含量的方法是采用硫酸鋅和亞鐵氰化鉀處理發(fā)酵產(chǎn)物，用苯酚-硫酸法在490nm波長(zhǎng)下測(cè)定。