[發(fā)明專利]一種奶牛專用乳酸菌的制備方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201510734864.0 | 申請日： | 2015-11-02 |
| 公開（公告）號： | CN105255768A | 公開（公告）日： | 2016-01-20 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 蔣建軍;剡根強(qiáng);王鵬雁;楊龍龍;剡文莉 | 申請（專利權(quán)）人： | 石河子大學(xué) |
| 主分類號： | C12N1/20 | 分類號： | C12N1/20;C12Q1/04 |
| 代理公司： | 石河子恒智專利商標(biāo)代理事務(wù)所(普通合伙) 65102 | 代理人： | 李靖 |
| 地址： | 832000 新*** | 國省代碼： | 新疆;65 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 奶牛 專用 乳酸菌 制備 方法 | ||
1.一種奶牛專用乳酸菌的制備方法，其特征在于主要包含如下步驟：
a、瘤胃乳酸菌的提取：
利用乳酸菌選擇SL培養(yǎng)基從健康奶牛的瘤胃液進(jìn)行菌群的分離鑒定，分離出乳酸菌菌株；
b、菌株環(huán)境抗逆性的鑒定：
分離株乳酸菌的環(huán)境抗逆性鑒定與篩選：將a步驟中分離出的菌株先通過API50CHL生化鑒定試劑盒鑒定到種，根據(jù)生長特性選取其中的28～34株菌株，在pH2～4、0.2～0.4％的膽鹽、25℃—40℃環(huán)境下進(jìn)行培養(yǎng)，篩選出2～4株生長良好，具有較強(qiáng)的環(huán)境抗逆性的嗜乳酸桿菌及發(fā)酵乳桿菌；
c、分離株耐藥性及抑菌試驗：
耐藥試驗：將篩選出的具有良好環(huán)境抗逆性的菌株進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，并在培養(yǎng)基中添加阿洛西林、青霉素、氨芐青霉素、阿莫西林、新霉素、慶大霉素、鏈霉素、恩諾沙星、氟苯尼考、林肯霉素、紅霉素中的至少一種抗生素，篩選出對以上藥物耐受超過百分之八十的菌株；
之后進(jìn)行抑菌實(shí)驗：對牛源致病性大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的拮抗抑制作用的實(shí)驗；將大腸桿菌或金黃色葡萄球菌涂抹在實(shí)驗培養(yǎng)基上，再在培養(yǎng)基上接種篩選出的乳酸菌，觀察抑菌斑的大小為抑菌圈直徑分別為18.3mm和16.4mm；
d、乳酸菌的擴(kuò)大培養(yǎng)及活菌制劑的配制：
用大麥芽汁400～600mL、水400～600mL，胰蛋白胨8～12g，酵母膏5～10g，碳酸鈣2～4g，分別制成固體和液體培養(yǎng)基，將分離株接種后置于5％CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)18～30h，乳酸菌擴(kuò)大培養(yǎng)濃度分別可以到達(dá)3.5×108CFU/mL、1.2×107CFU/mL。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的奶牛專用乳酸菌的制備方法，其特征在于：乳酸菌擴(kuò)大培養(yǎng)濃度為2×1010CFU/mL。
3.一種奶牛專用乳酸菌的使用方法，所述奶牛專用乳酸菌由權(quán)利要求1所述的方法制備，具體使用方法如下：每頭奶牛每天口服3～8mL，連用12～18天，犢牛口服1～3mL，連用8～12天，經(jīng)測定血清鈣及CD4+、CD8+、IFN-r免疫指標(biāo)均高于對照組，犢牛腹瀉發(fā)病率與對照組相比降低60％，表明乳酸菌制劑對圍產(chǎn)期奶牛和初生犢牛均有明顯的保健作用。
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