[發明專利]一種用于提高CIK細胞增殖速率的提取物制備方法

在審

• 申請號: 201510733428.1
• 申請日: 2015-10-31
• 公開（公告）號: CN105255828A
• 公開（公告）日: 2016-01-20
• 發明（設計）人: 秦嶺
• 申請（專利權）人: 江蘇善之源健康科技有限公司
• 主分類號: C12N5/0783
• 分類號: C12N5/0783;A61K35/17;A61P35/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種一種用于提高CIK細胞增殖速率的提取物制備方法。

背景技術

CIK是將人外周血單個核細胞在體外用多種細胞因子(如抗CD3單克隆抗體、IL-2和IFN-γ等)共同培養一段時間后獲得的一群異質細胞。由于該種細胞同時表達CD3+和CD56+兩種膜蛋白分子,故又被稱為NK細胞樣T淋巴細胞,兼具有T淋巴細胞強大的抗瘤活性和NK細胞的非MHC限制性殺瘤優點。

CIK細胞優點如下：1.CIK細胞增殖速度快，抗腫瘤活性細胞可大量增殖，且細胞活性也大大增強。2.CIK細胞具有識別腫瘤的機制，對正常的細胞無毒性作用。3.殺瘤譜廣，可用于白血病、淋巴瘤、肺癌、胃癌、腸癌等多種腫瘤的治療，對多重耐藥腫瘤細胞同樣敏感。4.是典型的個性化生物治療模式。將這類細胞回輸后，還能使機體免疫能力提高，產生特異的抗病毒作用，從而對腫瘤治療施以雙重的作用。5.由于CIK細胞是活化的自體細胞，用起來非常安全。

腫瘤生物治療是當今腫瘤研究領域的一大熱點，腫瘤生物治療包括細胞因子、基因治療、單克隆抗體、腫瘤疫苗和過繼性免疫治療等方法，其中腫瘤細胞過繼性免疫治療在腫瘤生物治療中占據著重要地位。細胞過繼免疫治療是目前研究較多并已進入臨床試驗的生物治療方法。它是將體外激活的自體或異體免疫效應細胞輸注給患者，殺滅患者體內的腫瘤細胞；適合細胞免疫功能低下的患者，如大劑量化療、放療后、骨髓移植后、病毒感染損傷免疫細胞數量及功能的患者。細胞因子誘導的殺傷細胞CIK的出現，為腫瘤過繼性免疫治療帶來了新的希望。CIK細胞是由美國斯坦福大學的SchmidtWolf等于1991年率先發現的，他們將人外周血單核細胞在體外用多種細胞因子共同培養一段時間后獲得了一群異質細胞,該細胞共同表達了CD3和CD56兩種膜蛋白分子，是目前所知殺傷活性最強的一種腫瘤生物治療效應細胞,該細胞兼具T淋巴細胞強大的抗瘤活性和NK細胞的非MHC限制性殺瘤等優點。結合手術切除、介入、射頻、氬氦刀等治療，可清除不能用手術切除的極微小瘤灶或是體內散存的瘤細胞，在延緩或阻止腫瘤的轉移或復發方面有重要作用；對于部分暫時不適宜做手術、介入或其它治療的腫瘤患者，也可以先進行CIK細胞治療，提高身體機能狀況，改善生活質量，爭取其它治療機會。

傳統的CIK細胞體外長期培養法采用靜態和間歇換液的方式，傳統培養方式為了獲得足夠數量的細胞，治療一個病人往往需要處理上百個培養瓶或培養袋，易引起污染，影響細胞質量和穩定性，因此離產業化和臨床要求甚遠。因此，CIK細胞的體外大量增殖，即如何進一步提高其體外增殖速率，是大規模使用CIK細胞免疫治療的關鍵所在。

發明內容

本發明的目的在于提供一種能夠大大提高CIK細胞增殖速率的提取物制備方法。

為了實現以上目的，本發明的技術方案如下：一種用于提高CIK細胞增殖速率的提取物制備方法，其特征在于：首先準備以下重量份的原料：黃芪8份,甘草10份，紅參12份，紅花15份、干姜20份，防風30份、制川烏3份，巖椒草13份、通草6份；然后按照以下步驟制備；

第一步，將以上原料加水煎煮；其中，加水量為原料重量的5-10倍，煎煮時間為3-4小時；然后過濾、濃縮收集提取液I；

第二步，將提取液I用乙醇沉淀，然后過濾，回收乙醇，得提取液II；

第三步，將精制提取液II經大孔吸附樹脂，然后用蒸餾水洗脫至無色，再用乙醇洗脫，收集洗脫液，再經0.45μm微孔濾膜濾過，濾液濃縮至5g生藥/ml，調pH值，再經0.22μm微孔濾膜濾過除菌，最后分裝即得中藥提取物。

進一步，第二步，第三步中采用的乙醇的用量與提取液同體積。

進一步，第一步中加水量為原料重量的8倍。

與現有技術方案相比，本發明的有益效果：本發明所述的中藥提取物與其他化學誘導增殖因子相比，對人體無毒副作用，故誘導增殖后的CIK細胞直接可以用于臨床試驗。(2)本發明的中藥提取物，具有明顯提高CIK細胞增殖速率的作用，激活后的細胞殺傷療效高于以前的無中藥提取物CIK細胞治療效果。

具體實施方式

下面對本發明作進一步說明。