[發明專利]一種纖維母細胞清洗液及其制備方法

在審

• 申請號: 201510726951.1
• 申請日: 2015-10-29
• 公開（公告）號: CN105255816A
• 公開（公告）日: 2016-01-20
• 發明（設計）人: 葛嘯虎;陳海佳;王一飛;黎娟妹
• 申請（專利權）人: 廣州賽萊拉干細胞科技股份有限公司
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071
• 代理公司: 北京市盈科律師事務所 11344
• 代理人: 張瑞杰

技術領域

本發明涉及細胞清洗液技術領域，具體涉及一種纖維母細胞清洗液及其制備方法。

背景技術

纖維母細胞，也稱為成纖維細胞，是疏松結締組織的主要細胞成分，屬于終末分化細胞，由胚胎時期的間充質干細胞分化而來。纖維母細胞基本不具有分化功能但分裂功能旺盛，在體外培養條件下能保持良好的分裂繁殖能力。皮膚內纖維母細胞的主要功能是分泌膠原蛋白、彈力纖維、透明質酸等細胞外基質，這種來源于自身的膠原蛋白修復體系一旦形成，它的生命旺盛期為10-15年。纖維母細胞是皮膚真皮中的主體細胞成分，它與自身分泌的膠原纖維、彈性纖維及基質成分一同構成了真皮的主體。纖維母細胞的主要功能是：合成和分泌膠原纖維、彈性纖維、基質大分子物質和某些生長因子，對維持皮膚的彈性和韌性具有重要作用，纖維母細胞的減少也是引起皺紋產生的重要原因。

隨著人們生活水平的提高，對自身的面容要求越來越高，更加注重容光煥發，目前，在美容性整形中，非手術性治療增長迅速，占據的比例已經超過了70％。皮膚填充劑有很多種類，由于纖維母細胞有合成膠原蛋白的功能，其運用也就迅速發展，所以自體纖維母細胞注射除皺成為一種新興的治療方法。

纖維母細胞是由人體皮膚組織中分離出來，由于表皮是暴露于空氣中，寄生了多種的微生物，要從皮膚組織中分離培養纖維母細胞，需要整個分離培養過程保持絕對無菌，所以處理皮膚組織塊過程中清除微生物是至關重要的步驟。

現有技術中，皮膚組織塊處理過程中很多時候沒辦法把細菌等微生物消除掉，導致培養中細胞被細菌污染，培養失敗；為了防止培養的細胞被細菌污染，通常在培養液中加入大量的抗生素，以抑制細菌生長，采用這種方式雖然在培養過程中沒有出現大量細菌生長，可細胞一旦到臨床運用，被抑制的細菌就是埋下的重大隱患，對使用者的身體健康造成影響，安全性不能滿足人們的要求。

發明內容

本發明針對現有技術中存在的問題，提供一種纖維母細胞清洗液，其不會對消化酶的活性造成影響，酶解活力好、消化時間短，獲得的纖維母細胞數量充足，活率高，在大大減少抗生素使用的同時，對細菌和真菌具有很強的抑制作用，對細胞起到良好的保護作用。

本發明還提供一種纖維母細胞清洗液的制備方法。

本發明通過以下技術方案實現該目的：

一種纖維母細胞清洗液，所述清洗液的原料包括D-Hank’s液、青霉素、萬古霉素，所述清洗液中青霉素的終濃度為30-100U/mL，萬古霉素的終濃度為5-50ug/mL。

作為優選的方案，所述清洗液中青霉素的終濃度為40-70U/mL，萬古霉素的終濃度為6-30ug/mL。

作為進一步優選的方案，所述清洗液中青霉素的終濃度為50U/mL，萬古霉素的終濃度為10ug/mL。

作為優選的，所述青霉素的濃度為0.5％，所述萬古霉素的濃度為0.1％。

一種纖維母細胞清洗液的制備方法，包括以下步驟：

分別將濃度為0.5％的青霉素、濃度為0.1％的萬古霉素加入到D-Hank’s液中，使得青霉素的終濃度為30-100U/mL，萬古霉素的終濃度為5-50ug/mL，混合均勻，制得纖維母細胞清洗液。

其中，所述D-Hank’s液事先于4℃的條件下儲存。

相對于現有技術，本發明的有益效果為：本發明的纖維母細胞清洗液包括D-Hank’s液、青霉素、萬古霉素，所述清洗液中青霉素的終濃度為30-100U/mL，萬古霉素的終濃度為5-50ug/mL，以D-Hank’s液為基礎液體，不含Ca²⁺和Mg²⁺，不會對消化酶的活性造成影響，酶解活力好，消化時間短，獲得的纖維母細胞數量充足，活率高，D-Hank’s液中含有的葡萄糖能夠在組織塊清洗過程中能提供組織營養，保持更好的細胞活力到培養階段，有利于細胞生長，采用青霉素與萬古霉素的組合有效的解決了部分真皮菌對青霉素產生的耐藥機制，能夠有效的清除細菌，清洗液中抗生素用量總體減少，在大大減少抗生素使用的同時，對細菌和真菌具有很強的抑制作用，對細胞起到良好的保護作用。

附圖說明

圖1為對照組的細胞生長狀態圖。

圖2為實驗組的細胞生長狀態圖。

具體實施方式

以下結合附圖及具體實施例對本發明進行詳細描述。

實施例1。

本實施例提供一種纖維母細胞清洗液的制備方法，包括以下步驟：