[發明專利]一種抑制水稻細菌性谷枯病菌生長的化合物

在審

• 申請號: 201510722564.0
• 申請日: 2015-10-31
• 公開（公告）號: CN105211076A
• 公開（公告）日: 2016-01-06
• 發明（設計）人: 不公告發明人
• 申請（專利權）人: 許自協
• 主分類號: A01N43/86
• 分類號: A01N43/86;A01P1/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及化合物的新用途，闡明藥物化學結構與細菌的生物活性之間的關系，更具體的說，是探索化合物對水稻細菌性谷枯病菌的抑菌和殺菌活性。

背景技術

水稻細菌性谷枯?。ㄓ址Q為水稻細菌性穎枯?。┦且环N嚴重的種傳病害，是主要危害水稻的細菌性病害，葉部接種表明燕麥等禾本科作物、菊科、豆科、蓼科和車前科等植物也顯示感病。

水稻細菌性谷枯病最早于1956年在日本九州被發現，1967年Kurita和Tabei首次將病原定名為穎殼假單胞菌，1994年改名為穎殼伯克氏菌。引起的水稻病害50年代首次被發現的是谷腐癥狀，故定名為細菌性谷枯病，但后來發現該病原菌主要引起嚴重的苗腐。20世紀70年代前該病一直是日本水稻上的次要病害，但到70年代后期由于日本實行機械化生產而進行大面積的工廠化育秧，導致水稻苗腐病大流行，成為日本水稻上最嚴重的病害之一。目前該病已經蔓延到印度尼西亞、泰國、越南、韓國、斯里蘭卡、馬來西亞、菲律賓等東南亞國家及南美洲的哥倫比亞。最近，非洲的坦桑尼亞及美國的路易安那州相繼報道有該病發生。我國臺灣地區在1983年簡錦璋等曾報道過稻細菌性谷枯病的發生。

水稻細菌性谷枯病菌為革蘭氏陰性細菌，桿狀，大?。?.5~2.5）μm×（0.15~0.17）μm，1~7根極生鞭毛，好氣性，有莢膜，不形成芽抱。在NA培養基上菌落生長慢，圓形、隆起、光滑、灰白色。在PDA培養基上菌落小，黃乳白色。在KB培養基上不產生熒光。明膠液化，吐溫-80水解，牛乳凝固，石蕊還原，硝酸鹽還原，過氧化氫酶和卵磷脂酶陽性。

水稻細菌性谷枯病菌可以通過胚芽鞘和葉片的氣孔侵入寄主，另外也可以通過由第一片葉子或次生根的出現造成的傷口侵染寄主，一些昆蟲咬食造成的傷口也可為病原菌的入侵提供方便。病原細菌侵染幼苗后潛伏在葉鞘等部位，隨著稻株的不斷生長漸向上位葉鞘擴展。水稻劍葉的葉舌被感染后，病原細菌在葉舌上繁殖，當稻穗抽出時接觸葉舌，病原細菌極易附著在稻穗上而感染稻谷引起發病。孕穗期以噴霧法接種病原，得到非常高的發病率，葉舌被感染再傳給稻穗，可能為其主要原因。為了解本病在田間的消長情形，日本后藤、渡邊等將稻種接種病原細菌后播種，育成秧苗并移植于田間，結果發現幼苗期稻株上的病原細菌濃度很高，但插秋時稻株上幾乎分離不到病原，直到分蘗最盛期以后，稻株上病原密度才逐漸提高。水稻細菌性谷枯病可經稻種傳播，帶菌種子是主要的初侵染源。浸種催芽時污染健康種子，在育苗期間感染發病，腐爛枯死或帶菌苗再移栽本田，其病菌潛伏到孕穗開花時再侵染谷粒，形成輕重不同的谷枯病狀和帶菌種子;播種帶菌谷粒，遇有適宜的發病條件，即抽穗期高溫多日照，降雨量少易發病。土壤里病谷和病草中的病菌可存活到次年的7~8月間，秋苗移栽后進行侵染。將被去稻谷埋在田間越冬，下期作稻種秧苗時，被害谷粒的病原細菌可感染稻株發。

發明內容

本發明采用體外抗菌試驗，研究化合物對水稻細菌性谷枯病菌的生物活性。

本發明的具體技術方案如下：

本發明的創新點是發現化合物對水稻細菌性谷枯病菌有良好的抑菌和殺菌活性，并測量得到其最小抑菌濃度MIC值和最小殺菌濃度MBC值，屬于首次公開。

所述化合物結構特征如下式所示：

具體實施方式

下面結合具體實施實例，進一步詳細地說明本發明。應理解下面實施例僅用于說明本發明而不用于限制本發明范圍。

實施實例1

測量最小抑菌濃度MIC值。

（1）營養肉湯的配制：取營養肉湯30g加1000mL蒸餾水即得。使用前121℃高壓蒸汽滅菌20min待用。

（2）營養瓊脂固體培養基的配制：取營養瓊脂45g加1000mL蒸餾水即得。使用前121℃高壓蒸汽滅菌20min待用。

（3）菌株的培養：操作于超凈工作臺上進行。吸取已滅菌的液體培養基l0mL，放在已滅菌的試管中，然后用接菌環挑取一個菌落，加到液體培養基中，放于培養箱內培養，細菌培養24h，培養溫度為28℃。

（4）菌液配制及計數：將培養后的菌液，釆用10倍稀釋法用液體培養基稀釋，并用血球計數板在顯微鏡上初步觀察計數，然后將菌液用液體培養基稀釋，作為加入供試品中的菌液。細菌采用平板計數法進行計數，將以上菌液用無菌生理鹽水再稀釋100倍，取50μL，均勻涂于已鋪有固體培養基的平皿中，培養24h，培養溫度為28℃。培養后，單個活細菌生長形成一個菌落，統計菌落數目，即可計算出樣品中的含菌數。

計算公式為：菌液濃度=n×20×100cfu/mL