[發明專利]以熒光碳點為探針運用倍頻散射法檢測胰蛋白酶的方法

在審

• 申請號: 201510719927.5
• 申請日: 2015-10-29
• 公開（公告）號: CN105424658A
• 公開（公告）日: 2016-03-23
• 發明（設計）人: 肖琦;黃珊;王魯敏;黃初升;盛家榮
• 申請（專利權）人: 廣西師范學院
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 北京遠大卓悅知識產權代理事務所(普通合伙) 11369
• 代理人: 靳浩

1.一種以熒光碳點為探針運用倍頻散射法檢測胰蛋白酶的方法，其特征在于，包括：

在激發波長為690nm的條件下，對熒光碳點與胰蛋白酶的結合物進行激發，以產生倍頻散射光，檢測倍頻散射光的強度，將所述倍頻散射光的強度與相同檢測條件下建立的胰蛋白酶濃度的標準曲線進行比對，以獲得胰蛋白酶濃度。

2.如權利要求1所述的以熒光碳點為探針運用倍頻散射法檢測胰蛋白酶的方法，其特征在于，胰蛋白酶濃度的標準曲線的建立方法具體為：

配制含熒光碳點的不同濃度的胰蛋白酶標準溶液，在激發波長為690nm的條件下，檢測標準溶液的倍頻散射光強度，建立標準溶液的倍頻散射光強度與胰蛋白酶濃度之間的線性關系，獲得胰蛋白酶濃度的標準曲線，用于檢測樣品溶液中胰蛋白酶濃度。

3.如權利要求2所述的以熒光碳點為探針運用倍頻散射法檢測胰蛋白酶的方法，其特征在于，含熒光碳點的不同濃度的胰蛋白酶標準溶液的配制方法具體為：

取不同體積的胰蛋白酶原溶液，并向其中分別添加相同體積的熒光碳點及不同體積的緩沖溶液至混合液的體積相等，得到等體積含熒光碳點的不同濃度的胰蛋白酶標準溶液。

4.如權利要求3所述的以熒光碳點為探針運用倍頻散射法檢測胰蛋白酶的方法，其特征在于，配制所述樣品溶液的方法為：

向未知胰蛋白酶溶液中加入一定體積的熒光碳點，使得與所述標準溶液中熒光碳點的體積相同，加入緩沖溶液至與所述標準溶液的體積相同，得到所述樣品溶液。

5.如權利要求3或4所述的以熒光碳點為探針運用倍頻散射法檢測胰蛋白酶的方法，其特征在于，所述緩沖溶液為pH為6的磷酸鹽緩沖溶液。

6.如權利要求2所述的以熒光碳點為探針運用倍頻散射法檢測胰蛋白酶的方法，其特征在于，所述標準溶液和所述樣品溶液中熒光碳點的濃度均為6.1mg/mL。

7.如權利要求2所述的以熒光碳點為探針運用倍頻散射法檢測胰蛋白酶的方法，其特征在于，所述標準溶液與所述樣品溶液的體積均為3mL。

8.如權利要求3所述的以熒光碳點為探針運用倍頻散射法檢測胰蛋白酶的方法，其特征在于，所述胰蛋白酶原液的濃度為3×10^-4mol/L、3×10^-5mol/L、3×10^-6mol/L或3×10^-7mol/L。

9.如權利要求1所述的以熒光碳點為探針運用倍頻散射法檢測胰蛋白酶的方法，其特征在于，所述熒光碳點的制備方法為：

步驟a、將1.0g分子量為1500的聚乙二醇和15ml甘油攪拌后置于微波反應器中，在140℃下高溫反應15min；

步驟b、將步驟a得到的樣品冷卻到50℃后加入1.0g的絲氨酸，然后升溫至180℃微波反應10min；

步驟c、將步驟b得到的樣品注入分子量1000的透析袋中透析24小時后進行蒸發濃縮，得到300ml的透析液；

步驟d、將所述300ml的透析液在60℃下旋轉蒸發一個小時，得到260ml樣品，所述樣品即為熒光碳點。