[發明專利]免疫應答的魚類啟動子及其應用

有效

• 申請號: 201510719080.0
• 申請日: 2015-10-29
• 公開（公告）號: CN105274108B
• 公開（公告）日: 2018-12-18
• 發明（設計）人: 趙紫霞;張研;徐鵬
• 申請（專利權）人: 中國水產科學研究院
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/85
• 代理公司: 北京遠大卓悅知識產權代理事務所(普通合伙) 11369
• 代理人: 史霞

本發明屬于魚類基因工程技術領域，本發明公開了一種免疫應答的魚類啟動子，該啟動子為一種免疫誘導型啟動子，該啟動子來源于鯉Rab1a?3基因，能夠在多種魚類組織內啟始下游基因轉錄，在免疫刺激下啟動子活性顯著增強。應用該魚類啟動子構建真核表達載體，并將其顯微注射入宿主細胞內，可以使得宿主細胞在受到免疫刺激后啟動子活性顯著增強，適用于抗病轉基因載體構建，避免外源免疫基因在健康狀態下的宿主細胞過量表達，形成能量浪費和生長負擔。

技術領域

本發明屬于魚類基因工程技術領域，特別涉及一種免疫應答的魚類啟動子及其應用，所述魚類啟動子能夠在多種魚類細胞內啟始下游基因轉錄，魚類啟動子活性在免疫誘導下顯著增強，可應用于抗病轉基因載體構建。

背景技術

伴隨著集約化水產養殖模式的興起，多種傳染性疾病在高密度養殖群體中時有爆發，造成了嚴重的經濟損失。病害頻發已成為當前水產養殖業面臨的嚴峻考驗。利用基因工程技術，將特異或非特異性免疫基因(如免疫球蛋白或抗菌肽等)轉入養殖魚類體內，培育疾病抗性品種，是防控養殖病害的有效途徑之一。

啟動子是所有轉基因策略中必備的轉基因元件，轉基因載體中負載的外源目的基因必須置于有效的啟動子介導之下，才能夠在宿主細胞內成功轉錄表達。早期的魚類轉基因模型使用來自哺乳動物的啟動子，可能引起生物倫理爭議，消費者食用時也會有顧慮，因此“全魚”轉基因模型的概念應運而生，即所有轉基因元件均來源于魚類基因組。

用于基因工程的啟動子常根據作用方式及功能分為三類：組成型啟動子(在全部或多數組織中保持持續的轉錄活性)，特異型啟動子(在特定的組織或發育時期具有轉錄活性)，和誘導型啟動子(受特定物理或化學信號調控)。目前已報道用作轉基因元件的魚類啟動子多為組成型，如鯉β-肌動蛋白、大馬哈魚金屬硫蛋白、美洲大綿鳚抗凍蛋白啟動子等。就抗病轉基因魚而言，使用組成型啟動子并不是最優方案，在未接觸病原的魚體內長期大量表達外源免疫基因并無必要，還可能因消耗能量而造成生長負擔。使用免疫誘導型啟動子，則可介導外源基因僅在魚體遭受免疫脅迫時出現高表達。

綜上所示，亟待有一種免疫誘導型啟動子獲得應用，以保證魚體遭受免疫脅迫時才出現外源免疫基因的高表達，在未接觸病原的魚體內，外源免疫基因不發生表達或僅維持低水平表達。

發明內容

本發明的一個目的是解決至少上述問題，并提供至少后面將說明的優點。

本發明還有一個目的是提供一種免疫應答的魚類啟動子及其應用，通過將本發明提供的魚類啟動子構建出真核表達載體，并將該真核表達載體顯微注射入宿主細胞內，以保證魚體在遭受免疫脅迫時才出現外源免疫基因的高表達，在未接觸病原的魚體內，外源免疫基因不發生表達。

為了實現根據本發明的這些目的和其它優點，提供了一種免疫應答的魚類啟動子，其特征在于，所述魚類啟動子的多核苷酸序列為(a)或(b)所示：

(a)SEQ ID No.1所示的多核苷酸序列；

(b)與(a)中多核苷酸序列根據堿基互補配對原則互補的多核苷酸序列；以及

(c)在高等嚴緊條件下能夠與上述(a)或(b)的多核苷酸序列雜交的核苷酸序列；

(d)對上述(a)或(b)所示多核苷酸序列進行一個或多個堿基的取代、缺失、添加修飾的核苷酸序列；

(e)與上述(a)或(b)所示多核苷酸序列具有至少90％同一性的多核苷酸序列。

優選的是，其中，所述魚類啟動子來源于鯉魚。

免疫應答的魚類啟動子在構建真核表達載體中的應用。

一種應用免疫應答的魚類啟動子構建真核表達載體的方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟一、應用特異引物Ⅰ對篩選獲得包含目的基因的文庫克?。?/p>