[發明專利]一種野生山桃稠李組織培養方法

在審

• 申請號: 201510717059.7
• 申請日: 2015-10-29
• 公開（公告）號: CN105165632A
• 公開（公告）日: 2015-12-23
• 發明（設計）人: 舒鈺;李晶;邢亞娟;王丹;蒙寬宏;王承義;趙學麗
• 申請（專利權）人: 黑龍江省林業科學研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 哈爾濱市松花江專利商標事務所 23109
• 代理人: 侯靜

1.一種野生山桃稠李組織培養方法，其特征在于它是按照以下步驟進行的：

一、外植體的選?。和庵搀w選取野外山桃稠李植株；

二、外植體消毒：取帶頂芽的側芽作為外植體剪成4～5cm的帶芽莖段，采用洗衣粉清洗干凈，然后再用清水沖洗1～2h；置于超凈工作臺上用體積百分含量為75％的乙醇浸泡30s，用無菌水沖洗3次，放在無菌濾紙上風干，再用質量百分含量為0.1％升汞消毒8min，然后用無菌水沖洗3次；

三、初代培養：將消毒外植體剪成1cm的莖段接入初代培養基中培養，培養條件為：培養溫度為20～24℃，光照強度為2000lx，光照時間每天12h，培養30天；所述初代培養基由改良WPS培養基+濃度為1.0mg/L的6-芐氨基腺嘌呤+濃度為0.5mg/L的萘乙酸組成；

四、不定芽的增殖培養：將初代培養的帶芽莖段接入增殖培養基中培養，培養條件為：培養溫度為20～24℃，光照強度為2000lx，光照時間每天12h，培養周期為40天；所述增殖培養基由改良WPS+濃度為1.5mg/L的6-芐氨基腺嘌呤+濃度為0.5mg/L的萘乙酸組成；

五、壯苗培養：將在增殖培養基中培養至長度達到1cm以上的不定芽逐個切下，接入1/2改良WPS培養基中培養，培養條件為：培養溫度為20～24℃，光照強度為2000lx，光照時間每天12h，培養周期為40天；

六、生根培養：將壯苗培養基中的健康健壯的芽接入生根培養基中培養，培養條件為：培養溫度為20～24℃，光照強度為2000lx，光照時間每天12h，培養30天；所述的生根培養基由1/4改良WPS培養基+濃度為0.5mg/L的萘乙酸組成；

所述的改良WPS培養基由大量元素、微量元素、鐵鹽和有機成分組成：

所述的大量元素為：濃度為400mg/L的硝酸銨、濃度為190mg/L的硝酸鉀、濃度為170mg/L的磷酸二氫鉀、濃度為370mg/L的硫酸鎂和濃度為684mg/L的硝酸鈣；

所述的微量元素為：濃度為27.85mg/L的硫酸亞鐵和濃度為37.28mg/L的乙二胺四乙酸鹽；

所述的鐵鹽為：濃度為22.5mg/L的硫酸錳、濃度為8.6mg/L的硫酸鋅、濃度為0.25mg/L的硫酸銅、濃度為6.2mg/L的硼酸和濃度為0.25mg/L的鉬酸鈉；

所述的有機成分為：濃度為0.1mg/L的鹽酸硫胺素、濃度為0.5mg/L的鹽酸吡哆辛、濃度為0.5mg/L的煙酸、濃度為2.0mg/L的甘氨酸和濃度為100mg/L的肌醇。

2.根據權利要求1所述的一種野生山桃稠李組織培養方法，其特征在于步驟一中選取野外山桃稠李植株是指：選取當年萌發的帶頂芽的側芽莖段為野外山桃稠李植株，將野外采集的山桃稠李植株置于低溫保溫箱里儲存，備用。

3.根據權利要求1所述的一種野生山桃稠李組織培養方法，其特征在于步驟二中外植體消毒：將采集的小枝條去掉不用的部分，剪成4～5cm的帶芽莖段，置于放有洗衣粉水的燒杯里，用紗布網將燒杯口套住，用手不斷晃動燒杯5min，將燒杯用流水沖洗1～2h。

4.根據權利要求1所述的一種野生山桃稠李組織培養方法，其特征在于步驟三、四和五中的培養基中分別加入濃度為20g/L蔗糖和濃度為6.5g/L瓊脂，培養基pH用氫氧化鈉調節至6.0。

5.根據權利要求1所述的一種野生山桃稠李組織培養方法，其特征在于步驟三中所述的初代培養過程中進行預防褐化。

6.根據權利要求5所述的一種野生山桃稠李組織培養方法，其特征在于進行預防褐化是指在第一次接種至培養瓶內后，每隔3天就換瓶一次，一共三次。

7.據權利要求1所述的一種野生山桃稠李組織培養方法，其特征在于1/4改良WPS培養基是指大量元素加入量為權利要求1改良WPS培養基的1/4體積，微量元素、鐵鹽和有機成分與權利要求1改良WPS培養基一致。

8.據權利要求1所述的一種野生山桃稠李組織培養方法，其特征在于1/2改良WPS培養基是指大量元素加入量為權利要求1改良WPS培養基的1/2體積，微量元素、鐵鹽和有機成分與權利要求1改良WPS培養基一致。