[發明專利]一種利于細胞粘附的功能絲素膜的制備方法在審
| 申請號： | 201510705912.3 | 申請日： | 2015-10-27 |
| 公開（公告）號： | CN105295080A | 公開（公告）日： | 2016-02-03 |
| 發明（設計）人： | 王建南;武明揚;裔洪根 | 申請（專利權）人： | 蘇州大學 |
| 主分類號： | C08J5/18 | 分類號： | C08J5/18;C08L89/00;C12N15/12;C12N15/70;C07K14/435 |
| 代理公司： | 蘇州市新蘇專利事務所有限公司 32221 | 代理人： | 朱亦倩 |
| 地址： | 215000 江蘇*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
| 權利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 利于 細胞 粘附 功能 絲素 制備 方法 | ||
1.一種利于細胞粘附的功能絲素膜的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：
步驟1)根據對柞蠶絲素或天蠶絲素氨基酸序列的分析，設計一個其中含有RGD三肽序列的單元肽段GSGAGGRGDGGYGDGSS，命名為(-RGD-)1多肽基因；
步驟2)采用基因工程技術對所述(-RGD-)1多肽基因進行4倍克隆，并設計構建攜帶有(-RGD-)4多肽基因的原核系統表達載體，所述(-RGD-)4多肽的氨基酸序列如SEQ.ID.NO.1；
或，采用基因工程技術對所述(-RGD-)1多肽基因進行8倍克隆，并設計構建攜帶有(-RGD-)8多肽基因的原核系統表達載體，所述(-RGD-)8多肽的氨基酸序列如SEQ.ID.NO.2；
步驟3)將已經設計構建好的攜帶有(-RGD-)4多肽基因或(-RGD-)8多肽基因的原核系統表達載體轉染大腸桿菌細胞，用Luria-Bertani培養基經異丙基-β-D-硫代半乳糖苷誘導培養數小時；
步驟4)離心細胞菌液，收集菌細胞并破碎菌細胞，然后將破碎后的蛋白上清液加入到谷胱甘肽轉移酶的親和層析中一步法純化、酶切、收集、凍干，最終獲得(-RGD-)4多肽粉末或(-RGD-)8多肽粉末，使用時配置一定濃度的水溶液；
步驟5)將家蠶蠶絲或蠶繭進行脫膠、溶解后，灌注于透析袋內，用去離子水透析，然后過濾濃縮至3～8％的家蠶絲素蛋白溶液，澆注于一定面積的器皿中風干，得到家蠶絲素膜；
步驟6)將制得的上述家蠶絲素膜浸漬于過量的交聯劑溶液中，再加入(-RGD-)4多肽或(-RGD-)8多肽，4℃過夜反應，即得功能絲素膜。
該專利技術資料僅供研究查看技術是否侵權等信息，商用須獲得專利權人授權。該專利全部權利屬于蘇州大學，未經蘇州大學許可，擅自商用是侵權行為。如果您想購買此專利、獲得商業授權和技術合作，請聯系【客服】
本文鏈接：http://www.szxzyx.cn/pat/books/201510705912.3/1.html，轉載請聲明來源鉆瓜專利網。
