[發明專利]一種無乳鏈球菌的gshF基因的突變基因及其應用

有效

• 申請號: 201510697906.8
• 申請日: 2015-10-23
• 公開（公告）號: CN105238797B
• 公開（公告）日: 2018-10-02
• 發明（設計）人: 徐志南;楊修亮;杭寶建;陳斌斌;李江濤;黃磊
• 申請（專利權）人: 山東金城生物藥業有限公司;浙江大學
• 主分類號: C12N15/52
• 分類號: C12N15/52;C12N9/00;C12N15/70;C12N1/19;C12P21/02;C12R1/84;C12R1/865
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 邱啟旺

1.一種無乳鏈球菌的gshF基因的突變基因，其特征在于，所述突變基因為gshFM1、gshFM2或gshFM3，所述gshFM1的核苷酸序列為SEQ ID NO：1、所述gshFM2的核苷酸序列為SEQ ID NO：2，所述gshFM3的核苷酸序列為SEQ ID NO：3。

2.一種由權利要求1所述的突變基因編碼的谷胱甘肽合成酶突變體，其特征在于，所述谷胱甘肽合成酶突變體為GshFM1、GshFM2或GshFM3，所述GshFM1由突變基因gshFM1編碼，其氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示，所述GshFM2由突變基因gshFM2編碼，其氨基酸序列如SEQID NO：5所示，所述GshFM3由突變基因gshFM3編碼，其氨基酸序列如SEQ ID NO：6所示。

3.一種權利要求2所述的谷胱甘肽合成酶突變體的合成方法，其特征在于，根據突變基因(gshFM1、gshFM2或gshFM3)的核苷酸序列設計上游引物和下游引物，利用PCR擴增的方法獲得擴增產物，并將擴增產物與表達載體pET-28a(+)相連后，轉化到大腸桿菌BL21宿主細胞中，經誘導表達后獲得谷胱甘肽合成酶突變體；所述突變基因的核苷酸序列為SEQ IDNO：1、SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：3。

4.根據權利要求3所述的合成方法，其特征在于，所述上游引物的序列為SEQ ID NO:7，下游引物的序列為SEQ ID NO:8。

5.一種權利要求1所述的突變基因的應用，其特征在于，所述應用為：將突變基因用于制備畢赤酵母工程菌、釀酒酵母工程菌。

6.根據權利要求5所述的應用，其特征在于，將突變基因用于制備畢赤酵母工程菌，具體為：將權利1所述的突變基因(gshFM1、gshFM2或gshFM3)與pGAPZA畢赤酵母表達載體相連接，得到重組質粒，將重組質粒利用內切酶Avr Ⅱ酶切線性化，導入巴斯德畢赤酵母菌GS115，得到表達權利2所述的畢赤酵母工程菌。

7.根據權利要求5所述的應用，其特征在于，將突變基因用于制備釀酒酵母基因工程菌，具體為：根據突變基因(gshFM1、gshFM2或gshFM3)的核苷酸序列設計上游引物和下游引物，利用PCR擴增的方法獲得PCR擴增產物；將釀酒酵母啟動子TEF1P、終止子TEF1T、EcorI線性化載體pRS426與PCR擴增產物共同轉化釀酒酵母By4741，利用釀酒酵母By4741自身重組系統得到重組質粒，并得到表達權利2所述谷胱甘肽合成酶的釀酒酵母工程菌，所述谷胱甘肽合成酶突變基因選自gshFM1、gshFM2或gshFM3。

8.根據權利要求7所述 的應用，其特征在于，所述上游引物的序列為SEQ ID NO:9，下游引物的序列為SEQ ID NO:10。

9.一種由權利要求5所述應用制備的畢赤酵母工程菌的應用，其特征在于，所述應用為：將權利要求5制備的畢赤酵母工程菌應用于合成谷胱甘肽。

10.一種由權利要求5所述應用制備的釀酒酵母基因工程菌的應用，其特征在于，所述應用為：將權利要求5制備的釀酒酵母工程菌應用于合成谷胱甘肽。