[發(fā)明專利]一種快速鑒別霍山石斛的方法

有效

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• 申請日: 2015-10-20
• 公開（公告）號: CN105203362B
• 公開（公告）日: 2018-07-06
• 發(fā)明（設計）人: 彭華勝;趙玉姣;彭代銀;陳乃富;韓邦興;程銘恩
• 申請（專利權）人: 安徽中醫(yī)藥大學;皖西學院
• 主分類號: G01N1/28
• 分類號: G01N1/28;G01N21/01
• 代理公司: 合肥金安專利事務所 34114
• 代理人: 金惠貞

1.一種快速鑒別霍山石斛的方法，其特征在于操作步驟如下：

（1）測量被測石斛每節(jié)的直徑和長度，與霍山石斛的直徑和長度特征比較；保留符合條件的一測石斛；具體操作工步如下：

通過Excel和SPSS軟件對所測數(shù)據(jù)進行分析，得到被測石斛各節(jié)直徑和長度變化趨勢圖；

霍山石斛莖的每節(jié)直徑和長度特征是：每節(jié)長度在2.5-22.6mm之間，從基部到莖尖的整體變化趨勢是先增加后減小，在第2或第3節(jié)達到最大；霍山石斛每節(jié)直徑在0.7-5.6mm之間，從基部到莖尖的整體變化趨勢是逐漸減小，基部最粗，莖尖最細；

將被測石斛的各節(jié)直徑和長度變化趨勢圖與霍山石斛的直徑和長度特征比較；對于符合霍山石斛各節(jié)直徑和長度特征的被測石斛確定為一測石斛，保留；不符合的被測石斛放棄；

（2）對一測石斛的各節(jié)進行徒手切片，顯微鏡觀察、拍照，數(shù)維管束個數(shù)；與霍山石斛的維管束特征比較；保留符合條件的二測石斛；具體操作工步如下：

對一測石斛莖的各節(jié)進行徒手切片，將切片置于顯微鏡下觀察并拍照，數(shù)維管束個數(shù)，得到霍山石斛各節(jié)維管束數(shù)目變化趨勢圖；

霍山石斛的維管束特征是：每節(jié)維管束個數(shù)在9-40個不等，從基部到莖尖的整體變化趨勢是逐漸減小，基部維管束數(shù)目最多，莖尖維管束數(shù)目最少；

將一測石斛的各節(jié)維管束數(shù)目變化趨勢圖與霍山石斛的維管束特征比較；對于符合霍山石斛的維管束特征的一測石斛確定為二測石斛，保留；不符合條件的一測石斛放棄；

徒手切片具體步驟為：取一測石斛新鮮莖，用自來水沖洗干凈，分別在各節(jié)的節(jié)間中部進行徒手切片，厚度為500um內；切片制 成水裝片；數(shù)維管束的具體操作如下：把水裝片放在普通光學顯微鏡下觀察并拍照；把所拍圖片用PS合成處理，數(shù)維管束數(shù)目并記錄；

（3）對二測石斛進行石蠟切片，得到中性樹膠封片

具體操作方法為：在二測石斛的新鮮莖的上、中、下三部分節(jié)間取樣，厚度為0.3-0.5cm，用FAA溶液固定，抽氣，24h后轉移至濃度70%的酒精中；再經(jīng)不同濃度酒精梯度脫水、浸蠟、換蠟、包埋、修塊， LEICA RM2265 石蠟切片機切片，厚度為10～15μm，粘片，烘片24h以上；番紅-固綠對染，得到中性樹膠封片；

（4）對中性樹膠封片進行顯微鏡觀察，與霍山石斛的特征條件比較；具體操作如下：

將中性樹膠封片置于物鏡下觀察其顯微特征，若觀察到諸多大小相近的維管束，且數(shù)目在9-40個，基部莖節(jié)維管束數(shù)目最多，中部較次，頂部最少；維管束鞘呈雙帽形，偶成環(huán)形；則該被測石斛屬于霍山石斛，否則不屬于霍山石斛；中性樹膠封片的顯微特征還包括：表皮由1列扁平的細胞組成，細胞壁微木質化，表皮外有一層黃色或橘黃色角質層，纖維群由1-2層細胞組成，草酸鈣針晶存在于近表皮處薄壁細胞及維管束旁薄壁細胞內，成束或散在。

2.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于：所述步驟（1）的具體步驟為：將待測樣品編號，從莖的基部開始編號，編號從1開始，然后依次增加；用1-150mm量程的游標卡尺分別對其各節(jié)的長度和直徑進行測量并記錄；所測直徑部位為各節(jié)節(jié)間中部；使用Excel和SPSS軟件對所測數(shù)據(jù)進行分析和做折線圖與箱式圖。

3.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于：所述步驟（2）的徒手切片具體操作為：首先用左手的拇指、食指和中指固定材料，右手持刀，手臂用力，使刀口從左前方緩慢向右后方下滑，刀面不斷加水潤滑；切片置成水裝片。

4.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于：所述步驟（3）中，F(xiàn)AA溶液為濃度70%的酒精：甲醛：乙酸=90:5:5的混合液。

5.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于：所述步驟（4）的具體操作方法如下：將中性樹膠封片置于Leica DM6000 B顯微鏡的載物臺上；開啟電源，調節(jié)光亮度；選擇普通光源；調節(jié)焦距，先在低倍鏡下觀察，再調到高倍鏡下觀察；找到合適清晰的視野，拍照，關閉顯微鏡；把所拍碎片經(jīng)PS合成處理。