[發明專利]改進的全生育期人工病圃棉花品種黃萎病抗性鑒定方法

有效

• 申請號: 201510675468.5
• 申請日: 2015-10-19
• 公開（公告）號: CN105359855B
• 公開（公告）日: 2018-06-15
• 發明（設計）人: 馮自力;朱荷琴;趙麗紅;馮鴻杰;李志芳;師勇強;袁媛
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院棉花研究所
• 主分類號: C12Q1/18
• 分類號: C12Q1/18;A01G7/00
• 代理公司: 北京法思騰知識產權代理有限公司 11318
• 代理人: 高宇

發明涉及棉花黃萎病鑒定領域，具體涉及改進的全生育期人工病圃棉花品種黃萎病抗性鑒定方法。包括以下步驟：(1)培養鑒定用病原菌，采用玉米沙粒培養基，將沙子和玉米粉按質量比1：1混勻；(2)建立病圃及接種，病原菌接種方法為種溝接種法；(3)調查棉花黃萎病病情；(4)評價棉花品種抗黃萎病性。根據本發明的方法，病圃發病均勻一直，有益于抗病鑒定結果的準確，病情調查分級標準科學、易掌握，充分反應棉花全生育期的抗病性，結果準確，并且，經濟、環保。

技術領域

本發明涉及棉花黃萎病鑒定領域，具體涉及改進的全生育期人工病圃棉花品種黃萎病抗性鑒定方法。

背景技術

黃萎病(Verticillium dahliae Kleb.)是棉花生產中的主要病害。20世紀60年代以后，隨著棉花面積的擴大，引種和調種頻繁，棉花黃萎病開始擴展蔓延，而且日益嚴重。有效控制黃萎病危害是棉花高產、穩產的關鍵，種植抗病品種是控制其危害的最經濟有效措施，而選育抗病品種的核心是準確評價品種的抗病性。

棉花品種抗黃萎病性鑒定方法分為苗期鑒定方法和成株期鑒定方法。苗期鑒定方法雖然快捷，但鑒定過程中進行了人為的傷根，其鑒定結果僅能體現品種的苗期抗性，與品種的真實抗性存在差異。由于棉花黃萎病是一種成株期病害，發生危害期為棉花的現蕾初期到收獲期，且不同品種對黃萎病的抗性與生育期相關，采用成株期鑒定能更真實反應棉花品種的抗黃萎病性。目前，成株期鑒定一般采用重病田或人工病圃，重病田鑒定由于不能控制病原菌的數量、發病不均勻等問題，只能用于育種材料的初篩，人工病圃成株期鑒定方法是對品種進行把關鑒定最可靠方法，并于2009年發布實施了國家標準GB/T 22101.5-2009。然而，人工病圃成株期鑒定方法的準確性和穩定性仍亟待提高。

發明內容

本發明的發明人為解決上述技術問題，從接菌量和接種方法、病害分級方法和結果評價方面改進現有的棉花品種鑒定方法，提出并完成本發明。

在抗病鑒定的過程中，人工病圃成株期鑒定方法存在一些較突出的問題：①建立人工病圃必要的接種技術不成熟，主要是接菌量不精確(每公頃450kg-750kg)、接菌方法不科學，大面積撒施菌種，然后翻耕，容易出現菌種分布不均勻的現象，最終導致發病不均勻；②病害調查的分級標準不科學，病害嚴重度與產量損失之間關系不密切，不能反應品種對病害的耐受性和抗病性；③抗病性評價方法不科學，依據發病高峰期一個點的病情指數評價品種的抗病性，不能體現棉花品種整個生育期的抗病性。

根據本發明的改進的全生育期人工病圃棉花品種黃萎病抗性鑒定方法，包括以下步驟：

(1)培養鑒定用病原菌

在超凈臺上，將分離純化的棉花黃萎病菌，從馬鈴薯瓊脂培養基(PDA)平板上的菌落邊緣挑取2mm²的新鮮菌塊，接種到查比克液體培養基(NaNO₃，2.00g； K₂HPO₄，1.00g；KCI，0.50g；MgSO₄·7H₂O，0.50g；FeSO₄，0.01g；蔗糖30.00g；用水定容至1000ml)中，置于25℃下，150r/min，黑暗培養6d備用。制作玉米沙粒培養基，具體為將沙子和玉米粉按質量比1：1混勻，加入質量比12％的水，取300g 裝入1000ml的克氏瓶，0.1MPa，高壓濕熱滅菌30min，冷卻到室溫備用；吸取上述液體培養的棉花黃萎病菌菌液15ml轉接至裝有玉米沙粒培養基的克氏瓶中，隨后放入到25℃培養箱中靜置培養7d，待黃萎病菌的菌絲布滿后，將培養物掏出，自然條件下風干備用。

(2)建立病圃及接種