[發明專利]一種新型抗原群的H9N2禽流感病毒及其用途

在審

• 申請號: 201510657531.2
• 申請日: 2015-10-12
• 公開（公告）號: CN105385662A
• 公開（公告）日: 2016-03-09
• 發明（設計）人: 葛菲菲;劉健;李鑫;鞠厚斌;齊新永;楊德全;徐鋒;周錦萍
• 申請（專利權）人: 上海市動物疫病預防控制中心
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00;C12N7/04;A61K39/145;A61P31/16;C07K16/10;G01N33/569
• 代理公司: 上海申匯專利代理有限公司 31001
• 代理人: 林煒

技術領域

本發明屬于生物技術領域，涉及一種禽流感病毒，具體來說是一種新型抗原群的H9N2禽流感病毒及其用途。

背景技術

H9N2亞型禽流感病毒(Avianinfluenzavirus，AIV)自上個世紀90年代以來已經廣泛在我國和世界各地流行，不僅僅給養禽業造成了巨大的經濟損失，而且給公共衛生安全造成的隱患不可估量，對人類的健康也構成了巨大的威脅。在我國，獨特的地理環境及養殖模式為此病的發生、傳播提供了有利條件。而免疫壓力及活禽市場的存在又為H9N2亞型禽流感病毒的重組和變異提供了必要條件。目前，H9N2亞型的疫苗已用于常規免疫，在一定程度上控制了H9N2亞型AIV的暴發流行。但是，由于禽流感病毒具有傳播快、感染宿主具有多樣性，病毒株血清型眾多、不同毒株間毒力差異大、變異性強等特點，造成局部地區仍有流行，且非典型性流行增多，免疫失敗也屢見不鮮。Radu等及Kilbourne等指出疫苗株應經常改變，因為老的疫苗株通常僅對新毒株產生部分的保護力。1999年，Garcia等證實禽流感暴發期間AIV分離株有很高的變異性，從而導致疫苗無效。Suarez等認為，AIV的變異可引起禽類甚至人類疫苗免疫的失敗。劉紅旗等研究指出，HA基因的變異可能與頻繁的疫苗免疫選擇壓力有關。本試驗擬通過HI交叉試驗來比較分析2002年，2006-2014年上海地區分離的H9N2亞型禽流感病毒之間的抗原相關性，探討其抗原性是否發生漂移，為H9N2亞型禽流感的防制提供參考依據。為了了解不同年份分離的H9N2亞型禽流感病毒與目前使用的疫苗株CK/SH/F/98之間的抗原相關性，挑選2002年，2006-2014年間在上海地區分離的14株H9N2亞型禽流感病毒以及CK/SH/F/98病毒，通過HI交叉試驗進行抗原性比較和分析。HI試驗結果顯示：2002年，2006-2014年間在上海地區流行的H9N2亞型不同毒株間已經發生了抗原性的漂移，劃分成4個不同的抗原群，A/chicken/Shanghai/Y1/2002，A/chicken/Shanghai/Y1/2006和A/duck/Shanghai/C60/2007同屬于一個抗原群，命名為A群；A/chicken/Shanghai/C/2011獨自成為一個抗原群，命名為B群；A/pigeon/Shanghai/JC1/2013和A/chicken/Shanghai/1107/2013歸為同一個抗原群，命名為D群；其余毒株均為一個抗原群，命名為C群。從抗原性聚類分析發現14株病毒均從CK/SH/F/98演化而來。綜上所述，整體來看一方面H9N2病毒是隨時間的增長，抗原發生了不同程度的漂變，但是也存在在某個時間段，多種抗原群共存的情況。該研究結果從理論上為我市制定禽流感防控策略、有效防制H9N2流行提供了科學的指導，為生產上H9N2亞型流感免疫與制苗毒株的選擇提供參考依據。

發明內容

針對現有技術中的上述技術問題，本發明提供了一種新型抗原群的H9N2禽流感病毒及其用途，所述的這種新型抗原群的H9N2禽流感病毒及其用途解決了現有技術中無法預防新的禽流感病毒從而導致新的禽流感疫情在禽類或者人類傳播的技術問題。

本發明提供了一種分離的H9N2禽流感病毒(抗原群D群)，其基因組由SEQIDNO：1、SEQIDNO：2、SEQIDNO：3、SEQIDNO：4、SEQIDNO：5、SEQIDNO：6、SEQIDNO：7和SEQIDNO：8所示的RNA片段組成。

本發明還提供了一種分離的H9N2禽流感病毒，其保藏號為CGMCCNO：10925。

本發明還提供了一種用于預防上述的H9N2禽流感病毒的疫苗，含有滅活的上述的H9N2禽流感病毒。

本發明還提供了上述的用于預防H9N2禽流感病毒的疫苗的制備方法，包括如下步驟：

a)，一個疫苗抗原液制備及毒價測定的步驟，將權利要求1或2所述的H9N2禽流感病毒用滅菌生理鹽水稀釋后，接種非免疫雞胚，收取尿囊液，測定其毒價：在10^9.6-10^9.8EID50，HA價在1：256-512之間，病毒液置冰箱中保存備用；

b)，一個抗原液滅活的步驟，將福爾馬林溶液加入病毒液中，檢驗合格后作為制備抗原液；

c)，一個制備油相佐劑的步驟；

d)，一個制備疫苗水相的步驟；

e)，一個配制疫苗的步驟，將油相與水相預混后，再將混合物注入到高壓勻漿泵內乳化，制成油包水乳劑即為疫苗。