[發(fā)明專利]功能化白蛋白及其納米制劑的制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510652216.0
• 申請(qǐng)日: 2015-10-10
• 公開（公告）號(hào): CN105288647B
• 公開（公告）日: 2018-05-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 姜虎林;何玉靜;邢磊
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國藥科大學(xué)
• 主分類號(hào): A61K47/62
• 分類號(hào): A61K47/62;A61K9/14;C07K14/77;C07K14/765;C07K14/76;A61P35/00
• 代理公司: 南京縱橫知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 32224
• 代理人: 劉艷艷;董建林

本發(fā)明公開了一種功能化白蛋白及其納米制劑的制備方法；功能化白蛋白納米制劑由功能化白蛋白、金屬離子、藥物組成；金屬離子同時(shí)與功能化白蛋白和藥物形成配位鍵，誘導(dǎo)自組裝形成納米顆粒。該納米制劑可以通過腫瘤細(xì)胞表面的白蛋白受體（SPARC）介導(dǎo)的內(nèi)吞作用將藥物靶向性地遞送到耐藥腫瘤細(xì)胞內(nèi)，有效避免了p?gp泵對(duì)藥物的外排作用，然后通過pH響應(yīng)實(shí)現(xiàn)配位鍵在酸性的腫瘤細(xì)胞環(huán)境中斷裂，藥物在胞質(zhì)內(nèi)釋放進(jìn)入細(xì)胞核嵌入DNA而抑制核酸的合成，進(jìn)而抑制腫瘤細(xì)胞的生長。通過體外表征說明該納米制劑能夠?qū)崿F(xiàn)較好的pH響應(yīng)性；并通過細(xì)胞水平上的活性評(píng)價(jià)，證明該系統(tǒng)能夠有效地將藥物遞送到細(xì)胞內(nèi)實(shí)現(xiàn)較好的pH響應(yīng)性釋放。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種功能化白蛋白及其納米制劑的制備方法，屬于納米藥物及傳遞載體技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

多藥耐藥 ( multidrug resistance，MDR) 是指腫瘤細(xì)胞長期接觸某一化療物后可產(chǎn)生對(duì)此種化療藥物耐藥性， 而且可對(duì)其他結(jié)構(gòu)和作用機(jī)制不同的多種化療藥物產(chǎn)生交叉耐藥性。阿霉素( Doxorubicin) 是乳腺癌化療的常用藥物，乳腺癌細(xì)胞對(duì)阿霉素產(chǎn)生耐藥是阿霉素化療失敗的主要原因(Detwiler A, et al., 2013)，也是影響臨床腫瘤患者預(yù)后的重要因素。現(xiàn)今逆轉(zhuǎn)乳腺癌細(xì)胞耐藥性的方法較少，目前研究發(fā)現(xiàn) MDR 的有效抑制劑有維拉帕米、環(huán)孢素 A、三苯氧胺、類固醇激素（Goncalves RS, et al., 2012; Zhang,et al., 2013; Zhang LH, et al., 2005）等，但這些耐藥逆轉(zhuǎn)劑干擾傳統(tǒng)的抗癌藥物藥代動(dòng)力學(xué)， 且可引起嚴(yán)重的毒副作用等，至今都未取得預(yù)期的臨床效果，因此在臨床上被限制使用。

近年來納米藥物用于逆轉(zhuǎn)腫瘤耐藥性受到越來越多的重視，脂質(zhì)體、高分子聚合物納米載體、膠束等納米制劑（XiongXB, et al., 2005；Ling Peng, et al., 2015)已被用于逆轉(zhuǎn)腫瘤耐藥性的研究。其逆轉(zhuǎn)原理為納米制劑通過內(nèi)吞作用進(jìn)入腫瘤細(xì)胞內(nèi)，通過響應(yīng)性釋放等性質(zhì)將藥物釋放在胞質(zhì)中，在很大程度上避開p-gp泵對(duì)游離抗腫瘤藥物的外排作用，增加藥物的攝取量，進(jìn)而增強(qiáng)抑制腫瘤細(xì)胞增殖的效果。

pH響應(yīng)性的藥物釋放系統(tǒng)是一類智能藥物釋放系統(tǒng)，它能根據(jù)所處環(huán)境的酸堿度對(duì)藥物進(jìn)行可控性的釋放。人體的腫瘤胞外環(huán)境（pH 5.7-7.8）比正常血液或組織（pH約7.4）顯酸性，而且細(xì)胞內(nèi)涵體和溶酶體的pH更分別低至5.0和4.5。該類新型納米載體可通過胞吞途徑攜載藥物進(jìn)入腫瘤細(xì)胞內(nèi)涵體，避免了 P-gp對(duì)藥物的識(shí)別，而后內(nèi)涵體的酸化(pH的改變)使其發(fā)生解聚或溶解，造成膜內(nèi)外滲透壓的變化，使內(nèi)涵體快速地膨脹破裂，從而集中釋放藥物至胞漿，完成對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用。因此，pH響應(yīng)性的藥物釋放系統(tǒng)在生物醫(yī)藥等領(lǐng)域尤其是抗腫瘤領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用前景。

本發(fā)明中使用內(nèi)源性分子白蛋白及配位基團(tuán)修飾（如組胺二鹽酸鹽等），通過化學(xué)反應(yīng)合成功能化白蛋白，不僅能夠改變白蛋白的等電點(diǎn)至堿性，可使其在中性環(huán)境下形成較好的納米顆粒；同時(shí)接枝的組胺能夠提供咪唑基團(tuán)，提高了載體的緩沖能力，重點(diǎn)是增加了能夠與金屬離子配位的基團(tuán)。

發(fā)明內(nèi)容

目的：為了克服現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足，本發(fā)明提供一種功能化白蛋白，通過pH響應(yīng)性金屬配位鍵包載藥物，無需有機(jī)溶劑及高壓均質(zhì)技術(shù)等方式實(shí)現(xiàn)納米顆粒的制備，可以在水溶液中自組裝形成納米顆粒，材料的合成簡(jiǎn)單易行、納米顆粒的制備綠色環(huán)保。

技術(shù)方案：為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：

一種功能化白蛋白，其特征在于：所述功能化白蛋白是通過化學(xué)反應(yīng)將配位基團(tuán)修飾到白蛋白游離基團(tuán)上，使具有與金屬離子配位的功能。

所用白蛋白，選自牛血清白蛋白（BSA）、人血清白蛋白（HSA）、重組人血清白蛋白、卵清蛋白、卵白蛋白、血清白蛋白、乳白蛋白、肌白蛋白、麥白蛋白、豆白蛋白；所修飾的配位基團(tuán)選自胺基、咪唑基、胍基、羥基、巰基、羧基、磺酸基、磷酸基。