[發明專利]一種淋巴癌特異性的熱休克蛋白復合物及其在淋巴瘤治療中的應用

在審

• 申請號: 201510647600.1
• 申請日: 2015-10-09
• 公開（公告）號: CN105175499A
• 公開（公告）日: 2015-12-23
• 發明（設計）人: 黃錫堅;張小俊
• 申請（專利權）人: 深圳市康爾諾生物技術有限公司
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;C07K14/47;C07K19/00;C12N5/0783;A61K39/00;A61P35/00
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技術領域

本發明屬于生物技術領域，更具體地，本發明公開了一類能有效激活淋巴癌特異性T細胞的熱休克蛋白復合物及其制備方法，以及其在治療和預防淋巴癌中的應用。

技術背景

惡性腫瘤是當今世界嚴重危害人類健康的疾病，在我國也是造成城鄉居民死亡的首要原因。淋巴瘤（lymphoma）又稱惡性淋巴瘤，是起源于淋巴結和其他淋巴組織的惡性腫瘤，分為霍奇金淋巴瘤(Hodgkin’sdisease,HD)和非霍奇金淋巴瘤(Non-Hodgkin’slymphoma,NHL)。根據最新的統計結果（2011年腫瘤登記數據），淋巴瘤發病率在我國常見惡性腫瘤中已排第8位。根據國內多中心性淋巴瘤病例分析結果（2012年）顯示，B細胞淋巴瘤是我國人群最常見的淋巴瘤類型，約占總患者數的66%。

過去化療是淋巴癌的主要治療手段。經過一段時間的綜合治療，部分患者的病情可完全緩解，但是如果停藥一段時間后，病情就可能復發。還有一部分患者，在開始治療階段就對該化療方案不敏感，或者即便達到完全緩解(CR)后短時間內再次復發。迫切需要尋找一種高效、低毒、副作用小的方案來挽救患者生命，延長患者的生存期。

隨著CD20單克隆抗體利妥昔單抗的問世，B細胞淋巴瘤的治療進入了一個全新的時代，它幾乎提高了所有B細胞淋巴瘤的治愈率。CD20白細胞分化抗原具有克隆特異性，僅表達于所有的前B細胞、成熟B細胞和超過95%的惡性B細胞表面，而不表達于造血干細胞、漿細胞和其他正常組織。利妥昔單抗通過和惡性B細胞表面的CD20結合誘導補體介導的細胞毒作用（CDC）和抗體依賴細胞介導的細胞毒作用（ADCC）殺傷腫瘤細胞，對于高度表達CD20的B細胞惡性淋巴瘤，利妥昔單抗的臨床療效已得到肯定。但其臨床反應率僅為50%左右，完全緩解率只有10%。普遍認為的原因包括患者ADCC和CDC不健全，細胞凋亡機制受限，抗CD20抗體的滴度過低等。

目前普遍認為激活特異性T細胞是腫瘤成功治療的關鍵。新近發展的CART技術通過抗原特異性抗體與T細胞受體（TCR）組成的嵌合分子激活特異性T細胞克隆，發揮T細胞殺傷功能治療腫瘤。該技術可以通過靶向CD20和CD19用于B細胞腫瘤的治療，已經取得了一定的效果。然而由于其中慢病毒的應用、外源基因工程細胞的引入帶來新的癌變風險和非特異損傷風險，以及引入細胞的不可控風險，這些還需要進一步的研究。

因此針對淋巴癌特異性抗原活化患者自身的T細胞，在受控有序的狀態下直接殺傷腫瘤細胞，是行之有效的淋巴癌治療手段，能夠有效的彌補上述方法的不足，是淋巴癌治療的重點研究方向。

Gp96是熱休克蛋白HSP90家族中的重要成員，主要定位于內質網腔(EndoplasmicReticulum)，在正常組織和腫瘤中均有廣泛表達。正常情況下gp96在細胞中呈低水平表達，而熱休克、葡萄糖缺乏、細菌和病毒感染等均可使其表達量上調。熱休克蛋白HSP78是細胞質中HSP70家族中的成員，分子量約78kDa。gp96分子、HSP78均具有多肽結合的能力，作為分子伴侶能與細胞中各種短肽結合。目前已證實gp96和HSP78分子可以結合多種組織特異性抗原多肽,包括泡狀口炎病毒抗原區肽、小鼠H-2Kb限制的卵清蛋白抗原表位肽、H-2La限制的白血病表位肽、乙肝病毒抗原肽等。

在細胞外，gp96可作為呈遞分子將結合的短肽呈遞給I類MHC分子，激活特異性和記憶性T細胞，引發機體細胞免疫反應，其免疫原性由gp96所結合的短肽決定。此外，gp96還可以活化樹突細胞（DC)促進MHCI類和MHCII類分子以及共刺激因子的表達，從而提高免疫反應。

因此，腫瘤自體gp96復合物因為攜帶有患者自身腫瘤的抗原肽，可以激活患者個體特異性T細胞反應殺傷腫瘤細胞，目前已成功應用于黑色素瘤、神經膠質瘤、腎癌等的臨床治療。在腫瘤自體gp96治療淋巴癌的I期臨床試驗中（20人），有1人病理結果證實清除了皮膚結節重點淋巴癌細胞，8個患者實現疾病穩定。然而限于這種治療方法對腫瘤組織大小的要求和疫苗制備的一次性，能夠完成有效療程的患者有限，自體gp96免疫治療淋巴癌的效果比較有限。

發明內容

因此，本發明要解決的技術問題是篩選能激活淋巴癌特異性T細胞的抗原。通過克服腫瘤細胞免疫編輯導致的低免疫原性，在健康個體及淋巴癌患者中誘導產生特異性細胞毒性T淋巴細胞(殺傷性T細胞，CTL)，利用CTL的強大抗淋巴癌作用治療和預防腫瘤，對正常細胞及組織無破壞作用。