[發明專利]對普羅威登斯菌O5和O21特異的核苷酸及其應用

在審

• 申請號: 201510633619.0
• 申請日: 2015-09-29
• 公開（公告）號: CN105154561A
• 公開（公告）日: 2015-12-16
• 發明（設計）人: 郭璽;劉斌;張媛媛;焦麗麗;王磊
• 申請（專利權）人: 南開大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/01
• 代理公司: 天津市杰盈專利代理有限公司 12207
• 代理人: 朱紅星

技術領域

本發明涉及對普羅威登斯菌O5和O21血清型特異的核苷酸，尤其涉及對普羅威登斯菌O5和O21血清型O抗原基因簇中單個基因特異的核苷酸及其應用。

背景技術

普羅威登斯菌（Providencia）是腸桿菌科中一種常見的革蘭氏陰性菌，是一種機會致病菌。主要通過院內感染或者食用海鮮感染該菌，可以引起呼吸道感染，也可引發敗血癥、泌尿系感染、繼發性腦膜炎等。分離于腹瀉大便、尿道感染、傷口、燒傷和菌血癥標本。

細菌分型與鑒定方法主要有傳統的表型方法、血清學方法以及分子鑒定方法。然而，隨著分子生物學的發展，傳統的血清分型和鑒定方法存在著一定的問題，如血清分型這種診斷方法需要大量的抗血清，而抗血清一般種類不全，數量不足，大量的抗血清在制備和儲存中也存在一些困難。另一方面血清分型方法耗時長、靈敏度低、漏檢率高、準確性差，不同的O抗原產生的抗血清之間經常存在交叉反應。因此，建立基于分子生物學技術的血清鑒定方法成為發展方向。

普羅威登斯菌的分子鑒定越來越受到人們的重視，成為普羅威登斯菌菌種與株型鑒定的重要依據，不少新菌也因此產生。分子生物學檢測技術具有速度快且易于大規模使用的優點，是目前國際上公認的致病菌檢測的發展方向，但當前的難點在于DNA靶標分子特異性較低。細菌表面多糖抗原的多樣性是由負責其合成的基因簇的遺傳多樣性導致的。長期以來，人們一直試圖探索存在于普羅威登斯菌中的表面多糖抗原這一重要致病因子的多樣性情況及相應的遺傳進化基礎。但該研究方向上總體進展非常緩慢，針對其多糖抗原多樣性和變異規律方面的認識基本還是空白，例如：人們尚不了解普羅威登斯菌中存在多少種表面多糖抗原以及哪些表面多糖抗原對于該菌的致病性和流行性具有重要意義，負責其表面多糖抗原合成的基因簇尚未被定位（其它單位預測的部分表面多糖抗原基因均不能與解析的多糖抗原化學結構很好對應）等。造成上述現象的主要原因是：多糖抗原合成基因簇組成復雜、基因功能較難預、糖合成基因鑒定困難等。此外，已進行部分相關研究的單位大多缺乏前期研究基礎。

在本發明中，我們在獲得普羅威登斯菌全部表面多糖抗原基因簇序列信息的基礎上，建立普羅威登斯菌分子血清學分型系統和快速檢測方法，具有重要的科學意義和較強的應用價值。

近年來，越來越多的分子技術用于病原菌的分型、鑒定、檢測及病害診斷，包括轉錄間隔區(ITS)序列分析、隨機擴增長度多態性(RAPD)分析、核糖體DNA限制性片段長度多態性(RFLP)分析等。分子生物學方法不僅可用于普羅威登斯菌的快速血清分型篩查，穩定的鑒定結果可以彌補表型特征鑒定方法的不足。和傳統檢測技術相比，這些基于多聚酶鏈式反應(PCR)的分子檢測技術，不需要經過病原菌的分離、純培養等過程，而且具有快速、靈敏、特異性強等優點。

聚合酶鏈式反應技術(Polymerasechainreaction,簡稱PCR技術)作為微生物檢測技術目前正在得到認同和推廣，該技術相對于傳統的方法有高通量、檢測速度快、特異性強、靈敏度高等優點，只需對樣品進行簡單的預增菌或增菌過程，再通過離心及裂解制備細菌DNA模板，就可以在高特異性引物介導下的PCR過程中擴增目標序列，達到檢測樣品中是否含有待測的致病性微生物的目的。這對檢驗檢疫部門和臨床檢驗無疑極大提高了工作速度和降低了工作成本。不論從國內和國際的角度來看，快速、準確地鑒定出血清類型，為普羅威登斯菌的防控提供有效技術支持是十分重要的。

發明內容

本發明的目的在于提供了本發明涉及對普羅威登斯菌O5和O21血清型特異的核苷酸，其特征在于所述的核苷酸具有：

1）SEQIDNO:1-4所示的核苷酸中的至少一種；

2）與SEQIDNO:1-4所示的核苷酸互補的核苷酸中的至少一種

所述的SEQIDNO:1-4如下：