[發明專利]HER2線性表位中和活性單克隆抗體及其應用

有效

• 申請號: 201510633467.4
• 申請日: 2015-09-29
• 公開（公告）號: CN106554415B
• 公開（公告）日: 2020-01-10
• 發明（設計）人: 孫樂;李茂華;張翠娟;張小剛;王慕旸
• 申請（專利權）人: 北京天成新脈生物技術有限公司
• 主分類號: C07K16/28
• 分類號: C07K16/28;C12N5/20;A61K39/395;A61K39/00;A61P35/00;G01N33/577
• 代理公司: 11002 北京路浩知識產權代理有限公司
• 代理人: 王文君

本發明提供HER2線性表位中和活性單克隆抗體及其應用。將含有HER2胞外區Domain 2/3之間374?398位氨基酸的多肽，序列如SEQ ID NO.5，與載體蛋白偶聯免疫小鼠制備獲得多株雜交瘤細胞分泌可以特異性識別乳腺癌細胞表面HER2且具有中和活性的單克隆抗體。本發明提供了上述多肽在制備HER2單抗及治療以HER2為靶標的疾病治療藥物中的應用。本發明的單抗與HER2結合的親和力介于1?4nM，結合到腫瘤細胞表面的HER2后，能夠有效抑制腫瘤細胞的增殖，誘導HER2內吞，成為非常理想的生物靶向治療抗體，將本發明的單抗與曲妥珠或帕妥珠聯合用藥，可增強治療效果，具有顯著的市場價值。

技術領域

本發明涉及免疫學領域及抗體制備技術，具體地說，涉及抗HER2線性表位中和活性單克隆抗體及其應用。

背景技術

人表皮生長因子受體2(HER2)是表皮生長因子受體(ErbB2)家族中的一員，是相對分子質量為185000的跨膜受體樣蛋白，具有酪氨酸激酶活性。HER2是重要的乳腺癌預后判斷因子，HER2陽性(過表達或擴增)的乳腺癌，其臨床特點和生物學行為有特殊表現，治療模式也與其他類型的乳腺癌有很大的區別。作用于HER-2靶點的藥物，是目前治療乳腺癌最常用最有效的藥物，主要有曲妥珠單抗、帕妥珠單抗等。

基因泰克公司早在1997年就上市了第一個針對乳腺癌標志物HER2的抗體藥物赫賽汀(Herceptin，注射用曲妥珠單抗)，每年銷售額可達50多億美元，目前成為仿制藥的熱點。2012年基因泰克又推出一種針對HER-Domain2位點的抗體藥，與赫賽汀聯合使用治療效果更佳。2013年3月，基因泰克又上市了赫賽汀和藥物DM1偶聯物，對癌癥晚期病人也有非常好的療效。如果能開發出與曲妥珠單抗和帕妥珠單抗的抗原位點不同的新的單抗藥物，不僅有利于打破壟斷，降低現有藥物的市場份額，降低癌癥治療成本，還有利于豐富治療癌癥的抗體藥物種類，與現有藥物聯合用藥、增加療效并鞏固治療效果。但目前還沒有針對Domain 2/3位點的單抗藥物的報道。

發明內容

本發明的目的是提供針對與曲妥珠單抗識別表位不同的人表皮生長因子受體2(HER2)單克隆抗體及其應用。

本發明提供的HER2線性表位中和活性單克隆抗體是以HER2氨基酸序列第374-398的多肽偶聯到KHL載體蛋白作為免疫原免疫小鼠后，制備雜交瘤細胞，篩選能夠穩定分泌特異性識別乳腺癌細胞表面HER2且具有生物學活性單克隆抗體的雜交瘤細胞株。上述用于免疫小鼠的多肽序列為：SLAFLPESFDGDPASNTAPLQPEQLQ。

本發明提供了人表皮生長因子受體2的線性表位多肽在制備HER2線性表位中和活性單克隆抗體中的應用，所述多肽的氨基酸序列為SLAFLPESFDGDPASNTAPLQPEQLQ，或該序列經替換、缺失或添加一個或幾個氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。

本發明提供了人表皮生長因子受體2的線性表位多肽在制備以HER2為靶標的疾病治療藥物中的應用，所述多肽的氨基酸序列為SLAFLPESFDGDPASNTAPLQPEQLQ，或該序列經替換、缺失或添加一個或幾個氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。

本發明將上述多肽序列與載體蛋白偶聯作為免疫原制備獲得的單克隆抗體能夠特異性地識別HER2蛋白的多肽序列，共獲得40個陽性克隆，復篩篩選出6個陽性克隆，進一步中和活性試驗篩選出2個陽性克隆，將這兩個單克隆抗體分別稱之為clone2H4和clone2D9。

本發明提供了HER2線性表位中和活性單克隆抗體clone2H4，

i)其輕鏈可變區的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，或該序列經替換、缺失或添加一個或幾個氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列；以及

ii)其重鏈可變區的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示，或該序列經替換、缺失或添加一個或幾個氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。