[發明專利]一種垂枝型墨西哥落羽杉組織培養方法

在審

• 申請號: 201510632331.1
• 申請日: 2015-09-29
• 公開（公告）號: CN105145368A
• 公開（公告）日: 2015-12-16
• 發明（設計）人: 姚德彪;湯桂鈞;顧建平
• 申請（專利權）人: 上海旭東園藝有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 上海申匯專利代理有限公司 31001
• 代理人: 翁若瑩

1.一種垂枝型墨西哥落羽杉組織培養方法，其特征在于，包括：

第一歩：選取當年萌發的垂枝型墨西哥落羽杉新枝，剪去針狀葉片，沖洗，消毒，用無菌水沖洗后用無菌濾紙吸干水份；

第二歩：在超凈臺上將第一步得到的新枝切成0.5-1.5cm長度的莖段進行新芽誘導，接種于第一培養基上進行新芽培養，所述第一培養基是在1/2MS培養基的基礎上添加了玉米素和荼乙酸及活性炭所得，第一培養基中玉米素的濃度為2.5-3.5mg/L，荼乙酸的濃度為0.1-0.3mg/L，活性炭的濃度為1.5-2.5g/L，待莖段萌發腋芽并長1cm以上時，將新芽切下接種至第二培養基上誘導叢生芽，所述第二培養基是在MS培養基基礎上添加了細胞分裂素、激動素、荼乙酸和活性炭所得，第二培養基中細胞分裂素的濃度為0.5-1.5mg/L，激動素的濃度為0.3-0.8mg/L，荼乙酸的濃度為0.1-0.3mg/L，活性炭的濃度為1.5-2.5g/L；

第三歩：將叢生芽切成單芽，接種至第三培養基中進行生根培養，所述第三培養基是在1/2MS培養基的基礎上添加了吲哚丁酸和活性炭所得，第三培養基中吲哚丁酸和活性炭濃度分別為0.3-0.8mg/L和1.5-2.5g/L，得到生根的試管苗；

第四歩：將生根的試管苗移栽至由重量比2.5-3.5∶1的泥炭和珍珠巖混合而成的基質中，澆足水后用塑料薄膜覆蓋保溫保濕防失水萎蔫，5-10天后揭開薄膜煉苗，每天葉面噴水3-5次，10-20天后施肥料液，25-35天后移栽至灌滿純泥炭的塑料穴盤中，經2-4個月培養后直接移栽至土壤或容器中。

2.如權利要求1所述的垂枝型墨西哥落羽杉組織培養方法，其特征在于，所述第一步中，當年萌發的垂枝型墨西哥落羽杉新枝為半木質化的新枝。

3.如權利要求1所述的垂枝型墨西哥落羽杉組織培養方法，其特征在于，所述的第一步中的清洗為用洗衣粉或洗潔精沖洗三遍，置自來水龍頭下沖洗2h，所述的消毒在無菌室超凈臺上進行，先用75vol％乙醇溶液消毒1min，然后用0.2vol％的潔爾敏溶液消毒15min，最后用8vol％次氯酸鈉溶液消毒18min。

4.如權利要求1所述的垂枝型墨西哥落羽杉組織培養方法，其特征在于，所述的第一培養基中玉米素的濃度為3mg/L，荼乙酸的濃度為0.2mg/L，活性炭的濃度為2.0g/L，瓊脂粉濃度為5.5g/L，蔗糖濃度為30g/L，pH值為5.8。

5.如權利要求1所述的垂枝型墨西哥落羽杉組織培養方法，其特征在于，所述的第二培養基中細胞分裂素的濃度為1mg/L，激動素的濃度為0.5mg/L，荼乙酸的濃度為0.2mg/L，活性炭的濃度為2g/L。

6.如權利要求1所述的垂枝型墨西哥落羽杉組織培養方法，其特征在于，所述的第三培養基中吲哚丁酸和活性炭的濃度分別為0.5mg/L、2.0g/L。

7.如權利要求1所述的垂枝型墨西哥落羽杉組織培養方法，其特征在于，所述的新芽培養是在溫度24℃、光照強度3000LX及每天光照時間12小時的條件下進行。

8.如權利要求1所述的垂枝型墨西哥落羽杉組織培養方法，其特征在于，所述的誘導叢生芽是在溫度24℃、光照強度3000LX及每天光照時間12小時的條件下進行。

9.如權利要求1所述的垂枝型墨西哥落羽杉組織培養方法，其特征在于，所述的生根培養是在溫度24℃、光照強度3000LX及每天光照時間12小時的條件下進行。

10.如權利要求1所述的垂枝型墨西哥落羽杉組織培養方法，其特征在于，所述的肥料液中含有0.1wt％硝酸銨、0.1wt％磷酸二氫鉀、0.1wt％硫酸鎂。