[發明專利]一種重組人3型腺病毒及制備方法和應用

在審

• 申請號: 201510630269.2
• 申請日: 2015-09-29
• 公開（公告）號: CN105219740A
• 公開（公告）日: 2016-01-06
• 發明（設計）人: 蔣再學;田新貴;陸小梅;駱慶明;馬強
• 申請（專利權）人: 東莞市第八人民醫院
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;C12N15/861;A61K39/295;A61K39/125;A61P31/14;C12R1/93
• 代理公司: 東莞市華南專利商標事務所有限公司 44215
• 代理人: 卞華欣

技術領域

本發明屬于重組病毒基因工程技術領域，具體涉及一種重組人3型腺病毒為載體的新型的腸道病毒71型（humanenterovirus71,EV71）-柯薩奇病毒A16型（CoxackievirusA16,CA16）-重組3型腺病毒(Had3)疫苗候選株及制備方法。

背景技術

手足口病（hand，footandmouthdisease，HFMD）是由人類腸道病毒引起的以發熱和手、足、口腔部位的皮疹或皰疹性咽峽炎為主要臨床特征的一種急性傳染病。HFMD主要在5歲以下兒童中高發，該病主要是由腸道病毒71型（humanenterovirus71，EV71）和柯薩奇病毒A16型（CoxackievirusA16，CA16）兩種病原體引起的。該病近些年在世界各地均有流行報道，雖然臨床上可以使用藥物對癥治療，但無法控制本病的流行傳播，每年高發期都會有大范圍的傳染病例出現。疫苗的使用被認為是控制病毒傳播的最佳方法。

人3型腺病毒（HAdV3）疫苗也在發展之中，其經腸道免疫一般不引起病癥，HAdV3也可以作為經腸道黏膜免疫的載體使用，其六鄰體的高變區可以插入15個氨基酸的外源片段，這樣將具有免疫活性的抗原片段展示的人3型腺病毒粒子的表面，隨著病毒的復制，含有抗原片段的重組子就會不斷復制，并且展示到人3型腺病毒粒子的表面的抗原片段具有一定的空間構象，具有更好的免疫原性。

中國公開專利201310043885.9，公開一種重組人3型腺病毒及其制備方法和應用，公開了在重組人3型腺病毒上插入EV71中和表位SP70和SP55，其能夠同時預防EV71感染和HAdv3感染的預防，但是對于預防手足病依然無法做到有效的預防。

發明內容

為了克服現有技術中存在的缺點和不足，本發明的目的在于提供一種重組人3型腺病毒，其具有可同時預防EV71和CA16，對預防手足口病有顯著的效果。

本發明的目的通過下述技術方案實現：

一種重組人3型腺病毒，所述人3型腺病毒六鄰體上同時插入有EV71的中和表位SP70和CA16的中和表位VP1-1，所述EV71的中和表位SP70的氨基酸序列為YPTFGEHKQEKDLEYC,所述CA16的中和表位VP1-1的氨基酸序列為PKPTSRDSFAWQTAT。

其中，所述EV71的中和表位SP70的替換區為HAdv3六鄰體的HVR1區，所述CA16的中和表位VP1-1的替換區為HAdv3六鄰體的HVR2區。

其中，所述EV71的中和表位SP70的替換氨基酸序列為HVR1區的NRDNAV,所述CA16的中和表位VP1-1的替換氨基酸序列為HVR2區的TTEGEE。

一種人3型腺病毒-EV71-CA16的雙價疫苗候選株，所述雙價疫苗候選株含有權利要求1-3任一項所述的重組人3型腺病毒。

一種載體，所述載體包含上述的重組人3型腺病毒。

一種制備上述重組人3型腺病毒的方法，包括如下步驟：

在重組人3型腺病毒基因組E3區插入EV71的VP1蛋白表達框，人3型腺病毒六鄰體上同時嵌入了EV71的中和表位SP70和CA16中和表位VP1-1，其中，所述EV71的中和表位SP70的氨基酸序列為YPTFGEHKQEKDLEYC，所述EV71的中和表位SP70的替換氨基酸序列為HVR1區的NRDNAV；所述的CA16中和表位VP1-1的氨基酸序列為PKPTSRDSFAWQTAT，所述的CA16中和表位VP1-1的替換氨基酸為HVR2區的TTEGEE。

一種重組人3型腺病毒的應用，所述雙價疫苗候選株用于手足口病的預防。

本發明所提供的重組腺病毒，允許CA16中和表位個別氨基酸的缺失、替換或添加。但需要保持中和表位的免疫原性；允許被置換的HVR2區個別氨基酸的缺失、替換或添加，但需要保持腺病毒的穩定性，同時保證外源表位的免疫活性；本發明中嵌入的CA16表位不限于VP1-1，也可以是其他的保護性T細胞表位或B細胞表位，但需要保持腺病毒的穩定性和保證外源表位的免疫原性。

本發明的有益效果在于：本發明在六鄰體衣殼上展示EV71中和表位的同時展示CA16的中和表位，該重組腺病毒可以產生抗CA16感染的免疫應答，多次免疫注射能加強免疫，該重組病毒可以同時預防EV71感染和CA16感染，對于預防手足口病具有顯著的效果。

具體實施方式