[發明專利]鑒定蘋果抗、感炭疽菌葉枯病的SSR分子標記及其應用

有效

• 申請號: 201510628110.7
• 申請日: 2015-09-28
• 公開（公告）號: CN105624280B
• 公開（公告）日: 2019-06-18
• 發明（設計）人: 劉源霞;戴洪義;祝軍;張玉剛;柏素花;侯鴻敏;孫曉紅
• 申請（專利權）人: 青島農業大學
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 青島致嘉知識產權代理事務所(普通合伙) 37236
• 代理人: 劉曉

本發明提出用于鑒定蘋果抗炭疽菌葉枯病的SSR分子標記，所述分子標記分別為S0607039；S0607001；S0506206；S0506078,S0506001 S0405195,S0405127,S0304673,S0304011。本發明還提出擴增用于鑒定蘋果抗炭疽菌葉枯病的SSR分子標記的引物。本發明通過自行設計的SSR標記對蘋果抗炭疽菌葉枯病基因進行了分子標記，確定所在的染色體位置及遺傳距離，構建了緊密連鎖的遺傳圖譜。距離抗性基因最近的分子標記能準確的鑒定出蘋果對炭疽菌葉枯病的抗性，為蘋果生產實踐及抗性育種提供有效工具，并為下一步抗性基因的克隆及功能驗證奠定了良好的基礎。

技術領域

本發明提供了一種鑒定蘋果抗感炭疽菌葉枯病的分子標記及應用，適用于蘋果對炭疽菌病葉枯病的抗性鑒定，尤其是為蘋果抗性育種提供早期有效的抗性預測，屬于分子生物學領域。

背景技術

蘋果炭疽菌葉枯病(Glomerella Leaf Spot，GLS)是近幾年在我國蘋果產區新出現的一種危害嚴重的流行性病害，主要危害蘋果葉片，造成病葉早期干枯、脫落，也侵染果實引起壞死性斑點。該病首次報導于巴西，1988年Leite等在巴西巴拿馬州‘嘎啦’和‘金冠’蘋果上發現了一種新型葉斑病，經鑒定其病原為圍小叢殼Glomerella cingulate(Leiteet al.,1988；González E et al.,1999，2003)，定名為圍小叢殼葉斑病(Glomerella leafspot,GLS)，在我國被稱為炭疽菌葉枯病。

在山東萊陽、江蘇豐縣、安徽碭山等地調查及本研究的室內接種鑒定均發現，不同蘋果品種對炭疽菌葉枯病的抗性存在顯著差異。國內常見的‘金冠’、‘嘎啦’、‘秦冠’和‘喬納金’等為高感品種，‘富士’和‘紅星’等為高抗品種，尤其是‘富士’在田間自然環境下幾近疫免。該結論與Becker、王嶶等報道的結果相吻合(Becker et al.,2000；王嶶等,2015)。

培育和種植抗病品種是防控植物病害的重要途徑之一。隨著分子生物學的快速發展，分子標記輔助選擇技術逐漸成為植物抗病育種的有效手段。研究蘋果對炭疽菌葉枯病的抗性遺傳規律，篩選蘋果對炭疽菌葉枯病抗性基因的分子標記對蘋果抗病分子育種有著極其重要的意義。然而，目前對于蘋果對炭疽菌葉枯病抗性的分子標記研究還未見報道。

發明內容

本發明通過自行設計的SSR標記對蘋果抗炭疽菌葉枯病基因進行了分子標記，確定所在的染色體位置及遺傳距離，構建了緊密連鎖的遺傳圖譜。距離抗性基因最近的分子標記能準確的鑒定出蘋果對炭疽菌葉枯病的抗性，為蘋果生產實踐及抗性育種提供有效工具，并為下一步抗性基因的克隆及功能驗證奠定了良好的基礎。其是通過以下技術方案實現的：

首先本發明提出用于鑒定蘋果抗炭疽菌葉枯病的SSR分子標記，所述分子標記包括：S0607039，含重復基序ct，產物大小為186bp；S0607001，含重復基序caggtcaggt；產物大小為269bp；S0506206，含重復基序ttggatgtg；產物長度為243bp；S0506078，含重復基序aaaagc；產物長度為304bp；S0506001，含重復基序acaaccaa；產物長度為304bp；S0405195，含重復基序tg；產物長度為258bp；S0405127，含重復基序at；產物長度為330bp；S0304673，含重復基序tg(ga)，產物長度為333bp；S0304011，含重復基序ag，產物長度為210bp。

進一步的，標記S0405127與S0304673分別位于R_gls基因兩側，其遺傳距離分別為0.5cM、2.3cM。

進一步的，S0607039，S0607001,S0506206,S0506001,S0506078,S0405195,S0405127,S0304673,S0304011的重組率分別7.3％，6.2％，6.2％，5.6％，5.6％，4.0％，0.5％，1.6％，11.9％。