[發(fā)明專利]一株高產(chǎn)鼠李糖脂的銅綠假單胞菌DB及其應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201510626827.8
• 申請日: 2015-09-28
• 公開（公告）號: CN105567581A
• 公開（公告）日: 2016-05-11
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 林軍章;馮云;譚曉明;段傳慧;王靜;徐登霆;孫剛正;胡婧;劉濤;巴燕;宋永亭
• 申請（專利權(quán)）人: 中國石油化工股份有限公司;中國石油化工股份有限公司勝利油田分公司石油工程技術(shù)研究院
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C09K8/582;C12R1/385
• 代理公司: 北京世譽(yù)鑫誠專利代理事務(wù)所(普通合伙) 11368
• 代理人: 郭官厚

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于微生物生物技術(shù)和環(huán)境生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一株高產(chǎn)鼠李糖脂的假單胞菌Pseudomonasaeruginosa.DB及其應(yīng)用。

技術(shù)背景

在能源日趨緊張的情況下，提高石油采收率已成為石油開采研究的焦點，近年來三次采油技術(shù)日益得到廣泛重視和現(xiàn)場應(yīng)用，因此，三次采油驅(qū)油劑的研發(fā)也越來越引起科研工作者的關(guān)注，現(xiàn)在常用的驅(qū)油劑主要以化學(xué)表面活性劑，如：石油磺酸鹽、烷基苯磺酸鹽和石油羧酸鹽等。目前，石油開采中驅(qū)油劑以化學(xué)表面活性劑為主，但由于化學(xué)表面活性劑耐溫耐鹽性能與油藏適應(yīng)性差，產(chǎn)量降低，生產(chǎn)成本較高，環(huán)境污染，表/界面活性較差等問題，因此在一定程度上限制了其在現(xiàn)場應(yīng)用，生物表面活性劑不但具有相容性好，無毒，能被微生物降解，而且具有較低的臨界膠團(tuán)濃度、較高的表界面活性，良好的乳化性能以及耐溫耐鹽等特性，因此具備高效、環(huán)保的特性，并且不以石油為原料，在石油開采、環(huán)境治理等領(lǐng)域應(yīng)用越來越廣泛，特別是在石油開采過程中可以直接利用微生物發(fā)酵液，省去分離純化過程，因而可大幅度降低成本。

鼠李糖脂作為生物表面活性劑具有綠色環(huán)保和良好的表界面活性和乳化功能，在油田驅(qū)油中表現(xiàn)出巨大的應(yīng)用潛力，但受到菌種性能和發(fā)酵工藝制約使鼠李糖脂產(chǎn)率低導(dǎo)致產(chǎn)品成本較高，很難實現(xiàn)其大規(guī)模工業(yè)化應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足而提供一株高產(chǎn)鼠李糖脂的銅綠假單胞菌(Pseudomonasaeruginosa)DB及其在微生物采油中的應(yīng)用。

本發(fā)明提供的高產(chǎn)鼠李糖脂的銅綠假單胞菌(Pseudomonasaeruginosa)DB菌株，以下簡稱DB，于2015年3月12日保藏于“中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心”(北京市海淀區(qū)中關(guān)村北一條13號中國科學(xué)院微生物研究所)，其保藏編號為“CGMCCNo.10618”，分類命名中文名稱為“銅綠假單胞菌”，拉丁文名稱為“Pseudomonasaeruginosa”。

本發(fā)明提供的銅綠假單胞菌DBCGMMCCNo.10618菌株，是從勝利油田油水井樣品中通過血平板和擴(kuò)油圈方法篩選得到，并通過耐溫耐鹽性能考察反復(fù)篩選傳代獲得。

銅綠假單胞菌DBCGMMCCNo.10618的形態(tài)學(xué)特性：在好氧固體培養(yǎng)基下培養(yǎng)1～2天出現(xiàn)大小一般為1.0～5.0mm乳白色菌落，細(xì)胞形態(tài)為短桿狀，大小1-5μm×0.5～1.0μm。

銅綠假單胞菌DBCGMMCCNo.10618的生理生化特性：好氧，生長溫度30～60℃，最佳生長溫度30～45℃，生長pH值范圍4～9，最佳生長pH范圍7.0～7.5，NaCl的耐受性0～5％。

銅綠假單胞菌DBCGMMCCNo.10618的種子液培養(yǎng)基為：葡萄糖10.0g/L、酵母粉3.0g/L、KH₂PO41.0g/L、Na₂HPO₄1.0g/L、MgSO₄·7H₂O0.5g/L。

銅綠假單胞菌DBCGMMCCNo.10618的發(fā)酵培養(yǎng)基：糖蜜70g/L，廢油脂120g/L，pH值為7.0～7.5。

銅綠假單胞菌DBCGMMCCNo.10618發(fā)酵條件：接種量8％，接種齡10h，初始pH7.5，溫度40℃，攪拌速度200rpm，pH＝7，體積10m³，通氣量：1.5L/min。

銅綠假單胞菌DBCGMMCCNo.10618在常溫常壓、上述營養(yǎng)培養(yǎng)基和發(fā)酵條件下產(chǎn)量為55g/L～80g/L。

銅綠假單胞菌DBCGMMCCNo.10618發(fā)酵液的性能評價參數(shù)：耐溫性、耐鹽性、乳化性能、表面張力、物理模擬實驗提高采收率值。

銅綠假單胞菌DBCGMMCCNo.10618發(fā)酵生產(chǎn)的鼠李糖脂發(fā)酵液性能參數(shù)評價方法：

(1)耐溫性能測定

取已經(jīng)配制好的不同濃度鼠李糖脂發(fā)酵液，在恒溫器中加熱到150℃維持兩個小時后，在室溫或60℃下測其表面張力。

(2)耐鹽性能測定

分別用不同濃度的NaCl溶液配制鼠李糖脂發(fā)酵液，配制后觀察是否有渾濁和沉淀產(chǎn)生。

(3)乳化性能測定

以石蠟做模型油相，配制不同濃度的鼠李糖脂發(fā)酵液，分別將25mL的鼠李糖脂發(fā)酵液與25mL油相加入到50mL的比色管中，然后在震蕩器上充分混合3min后，在60℃下靜止，記錄乳化情況。

(4)表面張力測定