[發(fā)明專利]基于FSHR基因的豬繁殖性狀相關(guān)的分子標(biāo)記及其檢測(cè)方法和應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510621805.2
• 申請(qǐng)日: 2015-09-25
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN105087820A
• 公開(kāi)（公告）日: 2015-11-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 吳井生;陳超;郭蘋;陳永霞
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江蘇農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 南京蘇高專利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙) 32204
• 代理人: 許丹丹

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及動(dòng)物分子育種領(lǐng)域，尤其涉及一種基于FSHR基因的豬繁殖性狀相關(guān)的分子標(biāo)記及其檢測(cè)方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

分子標(biāo)記輔助選擇是基因工程在現(xiàn)代家畜育種中的一項(xiàng)重要應(yīng)用，利用與育種性狀相關(guān)的各種標(biāo)記代替以表型為基礎(chǔ)的選擇，從分子水平上分析個(gè)體的遺傳組成，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)基因型的直接選擇，可克服直接選擇的弊端，提高選擇的準(zhǔn)確性和縮短世代間隔。

總產(chǎn)仔數(shù)、產(chǎn)活仔數(shù)等豬的繁殖性狀是重要的經(jīng)濟(jì)性狀，直接關(guān)系到養(yǎng)豬業(yè)的經(jīng)濟(jì)效益。

促卵泡素(FSH)是由垂體前葉嗜堿性細(xì)胞分泌的一種糖蛋白激素，在卵巢卵泡的生長(zhǎng)、發(fā)育、分化、成熟和排卵過(guò)程中起重要作用。由于FSH是一種生物大分子，不能透過(guò)細(xì)胞膜，只有通過(guò)位于靶細(xì)胞膜上促卵泡素受體(FSHR)的介導(dǎo)，將信息傳遞到靶細(xì)胞膜內(nèi)，從而發(fā)揮其生物學(xué)功能。FSHR基因的多態(tài)性研究報(bào)道主要集中在人、牛、綿羊、山羊上，目前未見(jiàn)FSHR基因與豬繁殖性狀之間關(guān)系的研究報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中存在的問(wèn)題，提供一種基于FSHR基因的豬繁殖性狀相關(guān)的分子標(biāo)記。本發(fā)明還提供了該分子標(biāo)記的檢測(cè)方法和應(yīng)用。

為達(dá)到上述目的，本發(fā)明是通過(guò)以下的技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)的：

本發(fā)明所述的基于FSHR基因的豬繁殖性狀相關(guān)的分子標(biāo)記，它為豬FSHR基因片段，所述的豬FSHR基因片段含有多態(tài)性位點(diǎn)，所述的多態(tài)性位點(diǎn)為如SEQIDNO.1所示序列中第1166位，所述的多態(tài)性位點(diǎn)具有C/T堿基的變異。

序列表中SEQIDNO.1所示的序列為豬FSHRmRNA序列，其第1166位為多態(tài)性位點(diǎn)，與豬總產(chǎn)仔數(shù)、產(chǎn)活仔數(shù)緊密相關(guān)，可利用該位點(diǎn)開(kāi)發(fā)與豬繁殖性狀相關(guān)的分子標(biāo)記。

本發(fā)明所述的豬FSHR基因片段的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示；或所述的豬FSHR基因片段的核苷酸序列如SEQIDNO.3所示。當(dāng)然，本發(fā)明所述的豬FSHR基因片段也可以為包含如SEQIDNO.2所示核苷酸序列的DNA片段。根據(jù)檢測(cè)方法，可以選擇合適長(zhǎng)度的能夠包含多態(tài)性位點(diǎn)的DNA片段。

本發(fā)明還提供了所述的分子標(biāo)記的檢測(cè)方法，包括：

(1)根據(jù)所述的分子標(biāo)記的核苷酸序列設(shè)計(jì)引物；

(2)以待檢測(cè)豬的基因組DNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增；

(3)判斷PCR擴(kuò)增產(chǎn)物中多態(tài)性位點(diǎn)的類型。

步驟(3)中，可對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序或電泳分析，判斷多態(tài)性位點(diǎn)的堿基類型。

優(yōu)選的，步驟(1)中，上游引物的核苷酸序列如SEQIDNO.10所示，下游引物的核苷酸序列如SEQIDNO.11所示。利用該引物，可采用PCR-SSCP的方法準(zhǔn)確方便的檢測(cè)多態(tài)性位點(diǎn)的類型。

作為另一種可選擇的，步驟(1)中，上游引物的核苷酸序列如SEQIDNO.4所示，下游引物的核苷酸序列如SEQIDNO.5所示。

本發(fā)明還提供了所述的分子標(biāo)記在豬繁殖性狀選擇中的應(yīng)用。

具體的，豬可以為小梅山豬、楓涇豬或大白豬。繁殖性狀為總產(chǎn)仔數(shù)或產(chǎn)活仔數(shù)。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果為：

本發(fā)明研究發(fā)現(xiàn)，豬FSHR基因第10外顯子存在一個(gè)突變位點(diǎn)(即多態(tài)性位點(diǎn))，該位點(diǎn)位于如SEQIDNO.1所示序列的第1166位，該突變位點(diǎn)與豬的繁殖性狀尤其是總產(chǎn)仔數(shù)或產(chǎn)活仔數(shù)相關(guān)，且容易檢測(cè)，從而本發(fā)明根據(jù)該突變位點(diǎn)提供了一種基于FSHR基因的豬繁殖性狀相關(guān)的分子標(biāo)記，并提供了該分子標(biāo)記的檢測(cè)方法及在豬繁殖性狀選擇中的應(yīng)用，為豬分子育種、研究豬繁殖生理機(jī)制提供基礎(chǔ)。

附圖說(shuō)明

圖1為實(shí)施例1豬FSHR基因第10外顯子SNPs篩選結(jié)果；

圖2為實(shí)施例1豬FSHR基因第10外顯子SNPs上氨基酸序列比對(duì)結(jié)果；

圖3為實(shí)施例1豬FSHR基因第10外顯子C1166T的PCR-SSCP檢測(cè)部分樣本的電泳結(jié)果；

圖4為實(shí)施例1基因型分型檢測(cè)中AA基因型個(gè)體的測(cè)序結(jié)果；

圖5為實(shí)施例1基因型分型檢測(cè)中BB基因型個(gè)體的測(cè)序結(jié)果。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡明本發(fā)明，應(yīng)理解這些實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍，在閱讀了本發(fā)明之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員對(duì)本發(fā)明的各種等價(jià)形式的修改均落于本申請(qǐng)所附權(quán)利要求所限定的范圍。

實(shí)施例1