[發明專利]測定人POT1基因rs10250202位點多態性的方法及試劑盒在審
| 申請號： | 201510618682.7 | 申請日： | 2015-09-24 |
| 公開（公告）號： | CN105256011A | 公開（公告）日： | 2016-01-20 |
| 發明（設計）人： | 王威;王思華;馮曉蕾;段曉冉;王彭彭;王團偉;崔旭東;燕貞;吳逸明;姚武;楊永利;施學忠 | 申請（專利權）人： | 鄭州大學 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 北京迎碩知識產權代理事務所(普通合伙) 11512 | 代理人： | 張群峰;呂良 |
| 地址： | 450001 *** | 國省代碼： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 測定 pot1 基因 rs10250202 多態性 方法 試劑盒 | ||
1.一種測定人POT1基因rs10250202位點多態性的方法，包括：
提供待測人基因組DNA；
提供擴增人POT1基因rs10250202位點附近序列的上游引物和下游引物，其中上游引物具有錯配堿基T；
以所述待測人基因組DNA為模板，利用上游引物和下游引物進行PCR擴增反應以獲得含TGATMA片段的擴增產物，其中M為人POT1基因rs10250202位點上的待定堿基A或C；
提供限制性內切酶；
利用限制性內切酶對所得擴增產物進行酶切以獲得相應的酶切產物；以及
根據所得酶切產物來確定人POT1基因rs10250202位點上的待定堿基M是A還是C，
其中，限制性內切酶為僅能夠切開TGATCA片段與TGATAA片段之一的限制性內切酶。
2.根據權利要求1所述的方法，其中在所得擴增產物上，上游引物的錯配堿基T與M之間相隔三個堿基GAT。
3.根據權利要求2所述的方法，其中在所得擴增產物上，上游引物末端堿基與M相鄰。
4.根據權利要求2所述的方法，其中在所得擴增產物上，上游引物末端堿基不與M相鄰。
5.根據權利要求1所述的方法，其中限制性內切酶為僅能切開TGATCA片段的BclI或其同裂酶。
6.根據權利要求1所述的方法，其中所得酶切產物包括三種片段類型：具有總片段長度的未切斷擴增產物、切斷后具有較長片段的擴增產物以及切斷后具有較短片段的擴增產物，通過判斷酶切產物所包含的片段類型來確定人POT1基因rs10250202位點上的待定堿基M是A還是C。
7.根據權利要求6所述的方法，其中判斷酶切產物所包含的片段類型是通過凝膠電泳聯合紫外燈拍照后與參照圖對比來進行的。
8.根據權利要求7所述的方法，其中參照圖是擴增產物在凝膠電泳標準設定時間后經紫外燈拍照后而得且僅具有第一參照圖像位置和第二參照圖像位置，其中第一參照圖像位置針對的是未切斷的總片段長度的擴增產物，而第二參照圖像位置則針對的是切斷后具有較長片段的擴增產物。
9.根據權利要求1所述的方法，其中通過設計上游引物和下游引物的長度而使得擴增產物的總片段長度在100至300bp之間，并且上游引物的片段長度至少為35bp，使得酶切切掉部分片段占總片段的長度的百分比超過20％。
10.一種用于測定人POT1基因rs10250202位點多態性的試劑盒，其包含：
用于PCR擴增人POT1基因rs10250202位點附近序列的上游引物和下游引物，其中上游引物具有錯配堿基T以獲得含TGATMA片段的擴增產物，其中M為人POT1基因rs10250202位點上的待定堿基A或C；以及
僅能夠切開TGATCA片段與TGATAA片段之一的限制性內切酶。
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