[發明專利]生產乙醇的重組釀酒酵母菌株、其構建方法以及利用該菌株生產乙醇的方法有效
| 申請號： | 201510617297.0 | 申請日： | 2015-09-24 |
| 公開（公告）號： | CN106554924B | 公開（公告）日： | 2019-12-06 |
| 發明（設計）人： | 李凡;張子劍;安泰;沈乃東;陳博;李文釗;武國慶;王春才;袁敬偉;李春玲;熊強 | 申請（專利權）人： | 中糧營養健康研究院有限公司;中糧集團有限公司;中糧生化能源(肇東)有限公司 |
| 主分類號： | C12N1/19 | 分類號： | C12N1/19;C12N15/81;C12P7/06 |
| 代理公司： | 11290 北京信慧永光知識產權代理有限責任公司 | 代理人： | 洪俊梅;張淑珍<國際申請>=<國際公布> |
| 地址： | 102209 北京市*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 釀酒酵母菌株 生產乙醇 敲除 醛糖還原酶基因 木糖代謝途徑 硝基苯磷酸酶 酵母細胞膜 乙醇轉化率 出發菌株 蛋白定位 定位基團 定位作用 關鍵基因 菌株生產 木糖代謝 共發酵 野生型 引入 乙醇 構建 菌株 外源 蛋白 基因 | ||
1.一種生產乙醇的重組釀酒酵母菌株，其特征在于，
相比于野生型釀酒酵母菌株，所述重組釀酒酵母菌株中以2:2:1:1:1:1的拷貝數比例引入了外源XI基因、XK基因、RPE1基因、RKI1基因、TAL1基因和TKL1基因；利用膜定位基團或蛋白將由所述外源XI基因和XK基因表達得到的XI蛋白和XK蛋白定位于所述重組釀酒酵母菌株的細胞膜上；以及，引入所述重組釀酒酵母菌株中的所述外源XI基因的拷貝數為2、4或6。
2.根據權利要求1所述的重組釀酒酵母菌株，其中，進一步敲除了GRE3基因。
3.根據權利要求2所述的重組釀酒酵母菌株，其中，進一步敲除了PHO13基因。
4.根據權利要求1-3中任一項所述的重組釀酒酵母菌株，其中，所引入的XI基因為XI-6m基因，其核苷酸序列由SEQ ID NO：2所示；所引入的XK基因的核苷酸序列由SEQ ID NO：3表示；所引入的RPE1基因、RKI1基因、TAL1基因和TKL1基因的核苷酸序列分別由SEQ ID NO：4-SEQ ID NO：7表示。
5.根據權利要求1-3中任一項所述的重組釀酒酵母菌株，其中，通過轉運蛋白XUT3或法尼基膜定位基團CAAX將所引入的XI基因和XK基因表達得到的XI蛋白和XK蛋白定位于所述重組釀酒酵母的細胞膜上，其中，所述法尼基膜定位基團CAAX中的C代表半胱氨酸，A代表疏水性氨基酸，X代表任意氨基酸。
6.根據權利要求5所述的重組釀酒酵母菌株，其中，所述法尼基膜定位基團CAAX為Cys-Ala-Ala-Ser。
7.根據權利要求6所述的重組釀酒酵母菌株，其中，編碼所述法尼基膜定位基團CAAX的核苷酸序列由SEQ ID NO：9表示。
8.根據權利要求5所述的重組釀酒酵母菌株，其中，所引入的XI基因和XK基因可與相同或不同的膜定位基團或蛋白融合表達。
9.如權利要求1-8中任一項所述的生產乙醇的重組釀酒酵母菌株的構建方法，其特征在于，以2:2:1:1:1:1的拷貝數比例向野生型釀酒酵母菌株中引入外源XI基因、XK基因、RPE1基因、RKI1基因、TAL1基因和TKL1基因；利用膜定位基團或蛋白將由所述外源XI基因和XK基因表達得到的XI蛋白和XK蛋白定位于所述重組釀酒酵母菌株的細胞膜上；以及，引入所述重組釀酒酵母菌株中的所述外源XI基因的拷貝數為2、4或6，從而得到所述重組釀酒酵母菌株。
10.根據權利要求9所述的方法，其中，進一步敲除了GRE3基因。
11.根據權利要求10所述的方法，其中，進一步敲除了PHO13基因。
12.使用權利要求1-8中任一項所述的生產乙醇的重組釀酒酵母菌株生產乙醇的方法。
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