[發(fā)明專利]一種煙草黑脛病抗性單株的鑒定方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201510617233.0
• 申請日: 2015-09-25
• 公開（公告）號: CN105075698B
• 公開（公告）日: 2017-07-11
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 方敦煌;肖炳光;陳學(xué)軍;童治軍
• 申請（專利權(quán)）人: 云南省煙草農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院
• 主分類號: A01G7/06
• 分類號: A01G7/06;A01H4/00;A01G7/00
• 代理公司: 昆明知道專利事務(wù)所(特殊普通合伙企業(yè))53116
• 代理人: 姜開俠,謝喬良

1.一種煙草黑脛病抗性單株的鑒定方法，其特征在于包括組培快繁、貼敷接種、煙苗培養(yǎng)及抗性判別工序，具體包括：

A、組培快繁：取團(tuán)棵期至旺長期煙草單株的最幼嫩頂葉葉片組織，常規(guī)消毒，切取小葉圓片不經(jīng)愈傷組織直接培養(yǎng)成苗，形成群體后，篩選長勢一致的單株組培苗移栽至漂浮盤上煅苗5~7天后，按常規(guī)漂浮育苗方式繼續(xù)培育至5~6片真葉苗，挑選長勢整齊的煙苗移栽至裝有育苗基質(zhì)的栽培盆中，待煙苗成活后，剪葉，整苗，以備接種；

B、貼敷接種：用已消毒的打孔器，從長滿黑脛病菌菌絲的培養(yǎng)基平板中打取直徑或邊長4~6mm的菌絲塊，將長滿菌絲的一面貼于微傷的煙苗根莖部，用保濕透氣材料包裹煙苗根莖部的菌絲塊貼敷處，每株煙苗貼敷菌絲塊1塊；以抗性品種RBST和感病品種紅花大金元進(jìn)行同樣的處理作為對照；

C、煙苗培養(yǎng)：將接種后的煙苗置于盛有水的淺盤中，維持土壤濕潤，在25~28℃，相對濕度75%以上，12h光照12h黑暗交替的人工氣候室中培養(yǎng)不少于14天；

D、抗性判別：接種后第3天開始觀察發(fā)病情況，第7天、第14天各調(diào)查1次，以最后一次調(diào)查的結(jié)果統(tǒng)計病情，煙草黑脛病以株為單位調(diào)查，以接種點病斑擴(kuò)展、煙苗凋萎記作發(fā)病，以接種點病斑不擴(kuò)展、煙苗直立、生長正常記作不發(fā)病，調(diào)查所有接種煙苗，以發(fā)病率a統(tǒng)計病情，按發(fā)病率a劃分抗感性，免疫或高抗的發(fā)病率為a=0，抗病的發(fā)病率為0＜a≤25%，中抗的發(fā)病率為25%＜a≤45%，中感的發(fā)病率為45%＜a≤65%，感病的發(fā)病率為65%＜a≤80%，高感的發(fā)病率為80%＜a≤100%，其中免疫或高抗、抗病、中抗的即為抗性材料。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述鑒定方法，其特征在于步驟A所述挑選長勢整齊的煙苗移栽至裝有育苗基質(zhì)的栽培盆中，每盆煙苗數(shù)不少于3株，每單株系煙苗數(shù)至少12株。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述鑒定方法，其特征在于步驟B所述長滿黑脛病菌菌絲的培養(yǎng)基平板為燕麥培養(yǎng)基平板。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述鑒定方法，其特征在于步驟B所述菌絲塊的直徑或邊長為5mm。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述鑒定方法，其特征在于步驟B所述微傷的煙苗根莖是采用彎頭眼科小鑷子輕刮莖基部表皮或4~6根昆蟲針束輕度刺傷莖基部表皮的方法處理，以形成微傷的表面。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述鑒定方法，其特征在于步驟B所述保濕透氣材料為育苗基質(zhì)。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述鑒定方法，其特征在于步驟C所述維持土壤濕潤，需使土壤的含水率保持在60%~80%。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述鑒定方法，其特征在于步驟C所述煙苗在人工氣候室中的培養(yǎng)時間為14天。