[發(fā)明專利]一種檢測日落黃的分子印跡電化學(xué)傳感器的制備方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201510614301.8
• 申請日: 2015-09-24
• 公開（公告）號: CN105353021A
• 公開（公告）日: 2016-02-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李劍波;羅川南;王曉嬌;段輝敏;王延輝;孫元玲;丁超凡;孫敏;馮娟娟;步亞南
• 申請（專利權(quán)）人: 濟(jì)南大學(xué)
• 主分類號: G01N27/48
• 分類號: G01N27/48
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種檢測日落黃的分子印跡電化學(xué)傳感器的制備方法，屬于電化學(xué)、分析化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

日落黃是中國批準(zhǔn)使用的食品添加劑，主要用于食品和藥物的著色，其使用范圍限于果汁飲料、碳酸飲料、配制酒、糖果、糕點(diǎn)、果凍、果子醬、西瓜醬罐頭、青梅、蝦片、植物蛋白飲料及乳酸菌飲料、腌制小菜、膨化食品等食品。人如果長期或一次性大量食用日落黃色素含量超標(biāo)的食品，會出現(xiàn)過敏、腹瀉等癥狀，當(dāng)攝入量過大，超過肝臟負(fù)荷時(shí)，會在體內(nèi)蓄積，對腎臟、肝臟產(chǎn)生一定傷害。食品添加劑安全性評價(jià)的權(quán)威機(jī)構(gòu)世界糧農(nóng)組織和世界衛(wèi)生組織的食品添加劑聯(lián)合專家委員會對日落黃的安全性進(jìn)行過評價(jià)，認(rèn)為該添加劑的每日允許攝入量為0-2.5mg/kg體重。目前檢測日落黃的手段有高效液相色譜法、薄層色譜法、極譜法、分光光度法，但這些方法操作繁瑣，前處理過程復(fù)雜，分析成本高，無法實(shí)現(xiàn)快速、實(shí)時(shí)檢測。申請?zhí)枮镃N201310478241的專利，公開了一種采用紫外可見分光光度法檢測日落黃，該方法對樣品進(jìn)行萃取，測定有機(jī)相吸光度，檢出限較高，樣品中的其他有機(jī)物存在干擾，對實(shí)驗(yàn)結(jié)果有一定影響。電化學(xué)方法能夠?qū)崿F(xiàn)簡單、快速、實(shí)時(shí)的檢測，申請?zhí)枮镃N201210255326的專利，公開了一種采用膨脹石墨為工作電極檢測日落黃的方法，將質(zhì)量比為99:1的膨脹石墨和石蠟的混合物填入電極中作為工作電極，甘汞電極為參比電極鉑絲電極為對電極采用差分脈沖伏安法測定日落黃，該方法對樣品前處理要求嚴(yán)格。因此尋找一種高選擇性、重現(xiàn)性好、簡單快速的檢測方法有非常重要的實(shí)用價(jià)值。

分子印跡技術(shù)是近年發(fā)展起來的一門結(jié)合高分子化學(xué)、材料科學(xué)及生物化學(xué)的交叉性學(xué)科技術(shù)。依據(jù)此技術(shù)制備的分子印跡聚合物，因具有穩(wěn)定性高，耐酸堿，可重復(fù)使用，壽命長，對印跡分子的立體結(jié)構(gòu)具有“記憶”功能而表現(xiàn)預(yù)定、專一的識別性能，在許多領(lǐng)域都有廣泛的應(yīng)用。將分子印跡技術(shù)與電化學(xué)傳感結(jié)合，不僅能夠充分利用電化學(xué)的高靈敏度還能克服干擾嚴(yán)重這一問題，實(shí)現(xiàn)1+1>2的效果。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的之一在于提供一種日落黃分子印跡聚合物的制備方法，使其具有高選擇性、有特異識別能力；

本發(fā)明的目的之二在于提供一種檢測日落黃的分子印跡電化學(xué)傳感器的制備方法，構(gòu)建的分子印跡電化學(xué)傳感器對日落黃的檢測具有高靈敏、抗干擾、簡單方便。

本發(fā)明的日落黃分子印跡聚合物的制備的技術(shù)方案，具體包括以下步驟：

稱取50~70mg氧化石墨烯溶于超純水中超聲分散0.5h，分別稱取50mg無水三氯化鐵和35mg的氯化亞鐵加入已分散的氧化石墨烯溶液中，N₂保護(hù)；滴加氨水至pH為9.0，80?C條件下攪拌0.5h，然后加入20~30μL水合肼，震蕩幾分鐘后，50?C加熱3h，冷卻，洗滌，30?C干燥得到磁性石墨烯MG固體。取10~15mgMG加入無水乙醇中，超聲分散均勻后，加入10~20mg1-丁基-3-甲基咪唑氫溴酸鹽，超聲0.5h，分離，將產(chǎn)物加入到15~30mL納米金溶膠AuNPs中，攪拌，至上清液變?yōu)闊o色，棄上清液，30?C干燥得產(chǎn)物MG-IL-AuNPs；

取0.2~0.3mmol日落黃SY溶解于甲醇-水(體積比4:1)溶液中，再加入100~200mgMG-IL-AuNPs納米復(fù)合材料和0.8~1mmol甲基丙烯酸，超聲分散，50?C下震蕩，預(yù)聚合2h，使模板分子、功能單體和納米復(fù)合材料充分混合。加4~5mmol二甲基丙烯酸乙二醇酯、50~60mL乙腈和10~20mg偶氮二異丁腈，通氮除氧，密封，50?C震蕩24h。分離，產(chǎn)物用甲醇-乙酸(體積比9:1)溶液洗至無色。乙醇洗至中性30?C條件下真空干燥得日落黃分子印跡聚合物。

本發(fā)明的日落黃分子印跡電化學(xué)傳感器的制備方法，具體包括以下步驟：

（1）依次用1.0μm、0.3μm、0.05μm的Al₂O₃拋光粉打磨直徑為3mm的玻碳電極(GCE)，分別在乙醇和超純水中超聲清洗2~3min，氮?dú)獯蹈桑?/p>

（2）將分子印跡聚合物20~30mg分散在1~2mL0.4~0.6%的殼聚糖溶液中，超聲40min后。將分子印跡聚合物的分散液滴涂到電極表面，即構(gòu)成日落黃分子印跡電化學(xué)傳感器(MIPs/GCE)；

（3）以MIPs/GCE為工作電極，Ag/AgCl電極為參比電極，鉑電極為對電極。在含有20mLpH7.0的PBS溶液的電解池中利用差分脈沖伏安法檢測日落黃，根據(jù)所得的峰電流值和日落黃濃度呈線性關(guān)系，繪制工作曲線。