[發(fā)明專利]一種活化部分凝血活酶時間測定試劑及其制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201510613661.6
• 申請日: 2015-09-23
• 公開（公告）號: CN105203777A
• 公開（公告）日: 2015-12-30
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 胡小偉;王華;高軍
• 申請（專利權(quán)）人: 青島古高生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/86
• 分類號: G01N33/86
• 代理公司: 青島中天匯智知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 37241
• 代理人: 萬桂斌

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種凝血試劑及其制備方法，特別涉及一種活化部分凝血活酶時間測定試劑及其制備方法。

背景技術(shù)

活化部分凝血活酶時間(APTT)可用于判斷內(nèi)源性凝血活性狀態(tài)，是臨床上主要的凝血性能測試指標(biāo)之一。活化部分凝血活酶時間測定試劑的主要組份為活化劑和磷脂，磷脂是含有磷酸的脂類，屬于復(fù)合脂。作為血小板替代物，磷脂參與內(nèi)源性凝血途徑。作為活化部分凝血活酶時間測定試劑的主要組份之一，磷脂富含不飽和脂肪酸，易被氧化從而產(chǎn)生一系列過氧化脂質(zhì)，從而影響了其生理活性。以磷脂酰膽堿為例，其分子中含有甘油、脂肪酸、磷酸及膽堿等基團(tuán)。同時，其分子中不同碳位上所接的脂肪酸不同：α碳位(R₁CO－)上接的幾乎都是飽和脂肪酸，而β碳位(R₂CO－)上接的一般為油酸、亞油酸、亞麻酸及花生四烯酸等不飽和脂肪酸。在化學(xué)性質(zhì)上，主要表現(xiàn)在脂鍵、脂肪酸和磷脂的X基(CH₂CH₂N(CH₃)₃)上，可發(fā)生包括氧化、羥基化等反應(yīng)。特別地，其中的不飽和脂肪酸易于氧化發(fā)生自發(fā)的氧化反應(yīng)，生成過氧化產(chǎn)物，從而影響了磷脂的性能。

為了避免APTT測定試劑中的磷脂氧化，同時也為了制備穩(wěn)定性較好的APTT測定試劑，包括避免試劑中微生物和細(xì)菌的繁衍，丁基羥基甲苯、丁基羥基茴香醚和疊氮酸鈉成為APTT測定試劑穩(wěn)定劑的主要選擇，這方面可查詢到的專利文獻(xiàn)很多，包括早期的專利文獻(xiàn)US4455377和US5091304。在這些常用的穩(wěn)定劑當(dāng)中，丁基羥基甲苯具有一定的毒性，毒性相對較小，而疊氮酸鈉的毒性較大，與銅管等接觸易于引爆，因此，增添了生產(chǎn)過程中原料的使用和控制難度。另外，除了加入丁基羥基甲苯或丁基羥基茴香醚、疊氮酸鈉以外，為了進(jìn)一步提升活化部分凝血酶測定試劑的穩(wěn)定性，在試劑中加入多糖或多醇類聚合物(JP2994557B2，JP3330685B2)，這類物質(zhì)的加入，可提高APTT所含組成尤其是活化劑的分散性和均勻性，或作為一種助懸劑，提高溶液的粘度，使膠體顆粒能夠長期懸浮在溶液中不會沉降，然而，這類高分子化合物的加入，在提升混合液粘度的同時，也會降低采用光學(xué)法測定的APTT值的準(zhǔn)確度。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明針對現(xiàn)有APTT測定試劑中穩(wěn)定劑的不足，提出一種新型的APTT測定試劑，生產(chǎn)安全性更高、穩(wěn)定性效果更強、檢測準(zhǔn)確度更高。

本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：

一種APTT測定試劑，組分包括：磷脂、活化劑及穩(wěn)定劑，所述的穩(wěn)定劑包括丙氨酸和兒茶酸，所述丙氨酸的加入量為質(zhì)量體積比1-4％，所述兒茶酸的加入量為0.5-5mM。

進(jìn)一步地，上述APTT測定試劑中還包括其它穩(wěn)定劑，包括：氯化鈉、丁基羥基甲苯、抗壞血酸、聚乙二醇、甘露醇、麥芽糖中的一種或幾種。

進(jìn)一步地，上述APTT測定試劑中各組分的含量為：磷脂0.002-0.05％、活化劑0.002-0.08％、丙氨酸1-4％、兒茶酸0.5-5mM，其中的百分比均為質(zhì)量體積百分比。

優(yōu)選地，上述APTT測定試劑中各組分的含量為：磷脂0.04％，活化劑0.05％，丙氨酸2.5％，兒茶酸1.5mM，其中的百分比均為質(zhì)量體積百分比。

上述其它穩(wěn)定劑的加入量為：氯化鈉0.5-3％、丁基羥基甲苯0.01-0.1％、抗壞血酸0.05-0.5％、聚乙二醇0.01-0.5％、甘露醇1-4％、麥芽糖1-3％，其中的百分比均為質(zhì)量體積百分比。

優(yōu)選地，上述其它穩(wěn)定劑的加入量為：氯化鈉1.5％，丁基羥基甲苯0.04％、抗壞血酸0.2％、聚乙二醇0.05％、甘露醇2％、麥芽糖的加入量為1.5％，其中的百分比均為質(zhì)量體積百分比。

所述活化劑為納米二氧化硅。

所述磷脂是磷脂酰乙醇胺、磷脂酰絲氨酸、磷脂酰膽堿和磷脂酰甘油中的至少兩種，并至少包含磷脂酰絲氨酸和磷脂酰甘油。

上述APTT測定試劑中還可加入羥乙基哌嗪乙硫磺酸緩沖液，加入量為25-75mM。

上述APTT測定試劑中還可加入調(diào)節(jié)APTT值的二價金屬離子的氯化物，包括氯化鎂、氯化鈣等。

上述APTT測定試劑的制備過程包括：制備羥乙基哌嗪乙硫磺酸緩沖液，調(diào)節(jié)緩沖液pH值至中性，并加入氯化鈉；向上述緩沖液中加入活化劑，經(jīng)攪拌混勻后，加入磷脂及其它組分，經(jīng)混勻攪拌并過濾后，即得到APTT測定試劑。氯化鈉早于其它組分加入，一方面起到溶液離子強度調(diào)節(jié)劑的作用，另一方面起到穩(wěn)定劑的作用。