[發明專利]一種鴨細小病毒毒株及其滅活疫苗和制備方法

有效

• 申請號: 201510606498.0
• 申請日: 2015-09-21
• 公開（公告）號: CN105219735B
• 公開（公告）日: 2018-04-03
• 發明（設計）人: 刁有祥;陳浩;楊晶;竇硯國;鄭肖強;牛曉宇;于相龍
• 申請（專利權）人: 山東農業大學
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00;C12N7/06;A61K39/23;A61P31/20
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及動物病毒學領域，提供了一種鴨細小病毒毒株及其滅活疫苗和制備方法。

背景技術

鴨細小病毒是細小病毒的一種，主要侵害1～3周齡的雛鴨，臨床以腹瀉、呼吸困難和腳軟為主要癥狀，一年四季均有發生，給鴨飼養帶來極大的經濟損失，是鴨飼養中主要的疾病之一，發病率和死亡率也較高。

2015年3月以來，我國山東、江蘇和安徽等地肉鴨群出現了一種疾病，經驗證為鴨細小病毒，該病以鴨喙發育不良，舌頭外伸為特征，本病主要發生在14日齡以上的商品鴨，鴨群發病率為10％-20％，最高可達50％，大群感染率最高可達100％，但該病不造成患鴨死亡。患鴨發育遲緩，體溫略升高，喙短，彈性降低，舌腫脹，外伸，感染后期患鴨脛骨和翅骨易發生骨折。該病主要導致鴨群料肉比上升，養殖成本升高，鴨出欄合格率降低。對肉鴨養殖業造成巨大的經濟損失。

眾所周知，疫苗接種是防止疫病爆發和避免造成巨大經濟損失的主要措施、關鍵環節和最后防線。組織滅活苗和疫苗是鴨飼養行業中常用的生物制劑，由于該病為新發疫病，目前國內外尚無預防該病的疫苗。因此，提供一種針對性的疫苗來防治該病成為亟待解決的問題。

發明內容

針對上述情況，本發明的發明人提供了一種鴨細小病毒毒株及其滅活疫苗和制備方法，該毒株為鴨細小病毒，具體命名為GT2015株，其生物保藏編號為CCTCC No：V201527；利用該毒株制備的疫苗有效解決了我國當前該病無法預防的現狀，提高肉鴨的出欄合格率，降低肉鴨養殖的料肉比，減少了該病造成了經濟損失，制備方法簡單，短時間內可制備完畢；安全性高，對環境沒有任何不良影響；使用操作方便，使用時取出組織滅活苗注射即可；適于規模化批量生產和應用；免疫效率高，接種后保護率可至100％；保質期可達12個月。

發明人首先對上述病毒進行了分離和鑒定，最終確定上述疾病為鴨細小病毒(Duck Parvovirus DPV)感染引起的一種鴨細小病毒病。進而發明人獲得了一株新鴨細小病毒毒株，通過毒種的分離培養、鵝胚中和試驗、病毒的PCR檢測及病毒的測序檢測實驗，確定該毒株為一株新的鴨細小病毒，命名為鴨細小病毒GT2015株。本發明鴨細小病毒GT2015株的分離結果顯示：本病毒能在鴨胚及其制備的的原代細胞培養物中增殖并形成病變，且隨著傳代次數的增加，病變越來越明顯。但是該病毒不能夠在雞胚、鵝胚上增殖。鴨胚盲傳3代可見絨毛尿囊膜水腫、增厚，頸部、胸部、爪、翅尖及喙旁均有出血，頭及頸部水腫。收獲的鴨胚尿囊液經紅細胞凝集試驗檢測無血凝活性。

發明人對該毒株進行了生物保藏，保藏單位為中國典型培養物保藏中心，生物保藏編號為CCTCC No：V201527。

在分離獲得上述毒株的基礎上，發明人進一步獲得了該毒株的滅活疫苗，同時提供了該鴨細小病毒滅活疫苗的制備方法，具體步驟如下：

(1)病毒增殖程序 將GT2015株按照0.2mL/胚接種9日齡健康鴨胚，120h后收獲病毒尿囊液，-20℃下保存；

(2)病毒的滅活 病毒尿囊液過濾處理，加入甲醛溶液至終濃度(體積分數嗎？)為0.1％，然后再37℃滅活16h，期間振搖3-4次，保存于4℃；

(3)滅活疫苗的的制備

a.油相的制備 白油94份、司盤-80 6份，混合后加熱，加入硬脂酸鋁2份混合均勻，即得油相；

b.水相的制備 吐溫-80 4份、滅活濃縮后的病毒抗原液96份，混合均勻，即得水相；

c.混合與乳化 6份油相放入膠體磨中，開動機器慢速攪拌,同時緩慢加入3份水相，加完后以8000-10000r/min乳化3分鐘,然后加入1份水相,繼續攪拌30秒,在終止攪拌前加入w/v 1％硫柳汞水溶液,使其終濃度w/v為萬分之一即得。

獲得滅活疫苗之后即可通過各種手段檢驗疫苗的效果，結果表明制備的鴨細小病毒滅活疫苗具有穩定的物理性狀和安全性，種鴨免疫后可以使子代雛鴨獲得抵抗鴨細小病毒感染，特別是針對GT2015株的抗感染能力。