[發(fā)明專利]一種提高大櫻桃花粉萌發(fā)率的方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201510599389.0
• 申請日: 2015-09-18
• 公開（公告）號: CN105154384A
• 公開（公告）日: 2015-12-16
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉吉祥;溫小林;吉沐祥;芮東明;毛妮妮;胡芳芳;魯群
• 申請（專利權(quán)）人: 江蘇丘陵地區(qū)鎮(zhèn)江農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所
• 主分類號: C12N5/04
• 分類號: C12N5/04;C12Q1/02
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11246
• 代理人: 龔燮英

1.一種提高大櫻桃花粉萌發(fā)率的方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)花粉的采集：4月初采集含苞待放的鈴鐺花帶回室內(nèi)，用軟毛牙刷刷下花藥，置于光滑紙面，用50目鐵篩除去花絲，把鮮花藥均勻地鋪在60cm×45cm的白紙上，置于20-25℃干燥培養(yǎng)箱中干燥散粉，每兩小時翻動一次，24h后，花藥開裂散出花粉，然后，把花藥倒入100目細(xì)籮篩，把花粉篩入鋁盆中，最后用毛刷將白紙上以及細(xì)籮篩上的花粉也輕輕刷入盆中；

(2)花藥的保存：將篩出的花粉用硫酸紙小袋包好標(biāo)記后放入塑料盒子中，再添加1.5-2倍的變色硅膠干燥劑，花粉要分散埋在變色硅膠中，然后密封，放入-18℃冰柜里貯藏備用；

(3)固體培養(yǎng)基的制備：在500mL的燒杯中加入100mL蒸餾水，再加入瓊脂，在微波爐中加熱，使之完全熔解，然后加入蔗糖，再加入少量硼酸，在其中加入微量聚乙二醇、維生素以形成花粉粒發(fā)芽的最適環(huán)境條件，促進(jìn)花粉的萌發(fā)，等到溶液冷卻后，調(diào)節(jié)pH值6.5，在熬制培養(yǎng)基時，應(yīng)在燒杯上的液面處用計號筆沿液面劃線標(biāo)記；當(dāng)液面在熬制過程中因水分蒸發(fā)下降時，應(yīng)及時添加蒸餾水，以保持培養(yǎng)基的標(biāo)準(zhǔn)濃度，并將熬制好的培養(yǎng)基溶液連燒杯放入盛有35℃熱水的容器中，防止冷卻凝固，以備隨后使用；

(4)器皿消毒：發(fā)芽實驗時所用的實驗用品都要經(jīng)過酒精消毒處理后備用，使用時要減少和手指接觸的面積，以減少污染；

(5)花粉的播種與培養(yǎng)：用滴管吸取培養(yǎng)基溶液，滴一滴于載玻片的中央，當(dāng)凝固后再進(jìn)行花粉的播種；播花粉時，用經(jīng)酒精消毒過的頭發(fā)絲蘸取花粉，在培養(yǎng)基的表面輕輕震動；播好后將載玻片放置于培養(yǎng)皿中，要事先在培養(yǎng)皿內(nèi)放好濾紙或棉墊并加水保濕；每種花粉做3個載玻片；而后在培養(yǎng)皿上用玻璃鉛筆標(biāo)號，并進(jìn)行記錄，記錄內(nèi)容包括花粉種類、采粉時間，播種時間；用濕紗布覆蓋后加蓋，放于光照培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)；花粉培養(yǎng)15min～25min后部分花粉開始萌發(fā)，花粉萌發(fā)后花粉管長度超過花粉粒直徑，花粉管開始快速生長；

(6)花粉的活力測定：培養(yǎng)3.5h～4h后，以花粉管長度大于花粉粒直徑為花粉萌發(fā)標(biāo)準(zhǔn)，每處理重復(fù)3次，每重復(fù)隨機觀察3～5個視野，每視野觀察花粉數(shù)30～80粒，統(tǒng)計花粉萌發(fā)率。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種提高大櫻桃花粉萌發(fā)率的方法，其特征在于，步驟(3)所述的固體培養(yǎng)基為0.5％瓊脂+10％蔗糖+0.3％硼酸+1mg·L^-1吲哚乙酸+30g·L^-1聚乙二醇+10mg·L^-1維生素Vc。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種提高大櫻桃花粉萌發(fā)率的方法，其特征在于，步驟(4)所述的實驗用品包括載玻片、蓋玻片、鑷子；所述消毒處理是將實驗用品用無菌紗布包裹浸入70-75％濃度的酒精中消毒10-15s，快速取出立即浸入飽和次氯酸鈉溶液中消毒6min以上，在消毒過程中輕輕晃動使其消毒充分，最后用無菌水沖洗多次。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種提高大櫻桃花粉萌發(fā)率的方法，其特征在于，步驟(5)所述的在用頭發(fā)絲蘸取花粉在培養(yǎng)基表面震動時，一要在培養(yǎng)基上劃波浪線，避免頭發(fā)絲過重地接觸培養(yǎng)基，破壞培養(yǎng)基的表面；二要注意盡量在培養(yǎng)基上均勻劃線，使得花粉的分布松散、均勻，不能密集成堆；三要注意適宜的播種數(shù)量。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的大櫻桃花粉采集與活力測定方法，其特征在于，所述的播種數(shù)量為一個顯微鏡視野內(nèi)分布80～120粒花粉粒。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種提高大櫻桃花粉萌發(fā)率的方法，其特征在于，步驟(5)所述的光照培養(yǎng)箱培養(yǎng)采用光照培養(yǎng)和暗培養(yǎng)相結(jié)合的方法；光照培養(yǎng)20min后轉(zhuǎn)為暗培養(yǎng)，再隔20min后切換為光照培養(yǎng)，如此反復(fù)。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種提高大櫻桃花粉萌發(fā)率的方法，其特征在于，所述光照培養(yǎng)光源采用日光燈，溫度控制在20℃-25℃，光照強度為10μmol.m^-2.s^-1～13μmol.m^-2.s^-1。