[發(fā)明專(zhuān)利]一種快速、高通量提取植物基因組DNA的方法及應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510599233.2
• 申請(qǐng)日: 2015-09-18
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN105087550A
• 公開(kāi)（公告）日: 2015-11-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 徐曉輝;孫偉;路興波;孫紅煒;李凡;高瑞;楊淑珂
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所
• 主分類(lèi)號(hào): C12N15/10
• 分類(lèi)號(hào): C12N15/10
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

1.一種快速、高通量提取植物基因組DNA的方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)取待提取的植物組織加入SDS提取液混勻，并充分研磨；所述SDS提取液配方為：80-120mMTris·HCl，40-60mMEDTA，80-120mMNaCl，0.5-1.5％w/vSDS，pH8.0；

(2)將研磨后的樣品于60-70℃加熱5～10min，并于室溫下高速離心處理；隨后吸取樣品上清液，并加入等體積的異丙醇混勻，室溫下靜置處理；

(3)將靜置處理后的樣品再次高速離心處理，并除去上清液，隨后加入質(zhì)量濃度不低于70％的乙醇，充分混勻；

(4)將混合后的樣品再次高速離心處理，完全棄去上清液后，將所述樣品干燥處理；

(5)向干燥后的樣品中加入雙蒸水，于35-40℃溫度下靜置，并常規(guī)保存，即得所需的植物基因組DNA作為模板進(jìn)行后續(xù)的PCR反應(yīng)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速、高通量提取植物基因組DNA的方法，其特征在于，所述步驟(1)中，所述SDS提取液配方為：100mMTris·HCl，50mMEDTA，100mMNaCl，1％w/vSDS，pH8.0。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的快速、高通量提取植物基因組DNA的方法，其特征在于，所述步驟(1)中，所述植物組織的質(zhì)量與所述SDS提取液的體積比為1∶0.2-0.5，其中，所述質(zhì)量與體積的比例單位為g/mL。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的快速、高通量提取植物基因組DNA的方法，其特征在于，所述植物組織的質(zhì)量與所述SDS提取液的體積比為1∶0.3。

5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一所述的快速、高通量提取植物基因組DNA的方法，其特征在于，所述步驟(2)、(3)和(4)中，所述高速離心步驟的轉(zhuǎn)速彼此獨(dú)立的為10000-12000rpm，并離心處理8-15min。

6.根據(jù)權(quán)利要求1-5任一所述的快速、高通量提取植物基因組DNA的方法，其特征在于，所述步驟(1)中，所述植物組織包括植物的幼苗、子葉、真葉、嫩莖或嫩根部位組織。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的快速、高通量提取植物基因組DNA的方法，其特征在于，所述植物包括棉花、油菜、水稻、玉米、小麥或者大豆。

8.根據(jù)權(quán)利要求1-7任一所述的快速、高通量提取植物基因組DNA的方法，其特征在于，所述步驟(1)中，所述研磨步驟是利用高通量組織研磨儀進(jìn)行研磨。

9.根據(jù)權(quán)利要求1-8任一所述的快速、高通量提取植物基因組DNA的方法，其特征在于，所述步驟(4)中，所述干燥步驟為真空干燥。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的快速、高通量提取植物基因組DNA的方法，其特征在于，所述步驟(4)中，所述干燥溫度為50-70℃。