[發明專利]microRNA mimics用于制備治療脈絡膜新生血管藥物的應用

在審

• 申請號: 201510589006.1
• 申請日: 2015-09-16
• 公開（公告）號: CN105126122A
• 公開（公告）日: 2015-12-09
• 發明（設計）人: 侯慧媛;高凡;梁宏亮;王雨生;呂洋;王海燕;郭長梅
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第四軍醫大學
• 主分類號: A61K48/00
• 分類號: A61K48/00;A61K31/7105;A61K31/7088;A61P27/02
• 代理公司: 西安恒泰知識產權代理事務所 61216
• 代理人: 史玫

技術領域

本發明屬于生物醫療技術領域，具體涉及microRNAmimics用于制備治療脈絡膜新生血管藥物的應用。

背景技術

脈絡膜新生血管(choroidalneovascularization，CNV)是40余種眼部疾病的共有病變，發病率高，嚴重威脅視功能。CNV病因復雜，發病機制尚不明確。目前臨床上針對CNV雖有多種治療方法，但存在著療效不佳、復發率高、長期安全性不確切和價格昂貴等問題，給家庭及社會帶來沉重的負擔，該領域研究已成為國家重大的戰略需求。探索CNV發病機制、積極尋找高效靶點抑制新生血管生成，是從根本上治愈CNV相關疾病的希望所在。由于新生血管的形成是多種細胞、分子共同作用的結果，細胞、分子間的相互作用又錯綜復雜，針對單一細胞/因子開發的藥物防治效果往往有限。積極尋找調控新生血管生成機制中的關鍵節點，對于CNV的防治具有重要意義。

發明內容

本發明提供了microRNAmimics用于制備治療脈絡膜新生血管藥物的應用。

所述的microRNAmimics為miR188-5p模擬物。

本發明還提供了microRNAagomir用于制備治療脈絡膜新生血管藥物的應用。

所述的microRNAagomir為經甲基化修飾的miR188-5p模擬物。

本發明的有益效果是：

新生血管生長是一個較為長期的過程，采用新生血管抑制因子治療CNV需要尋找更為有效的方式。在CNV的發生發展過程中，骨髓來源細胞可以特異性趨化至CNV處，參與病理性新生血管形成，是CNV的重要組成成分。發明人通過microRNA調節骨髓來源細胞MMP表達，利用骨髓來源細胞向CNV趨化的特性通過常規靜脈輸入實現骨髓來源細胞在CNV部位的高精準靶向給藥與緩釋給藥，抑制病理新生血管形成，實現有效治療CNV的目的，并避免反復眼內注射給藥的風險。

發明人發現，CNV生成時BMCS侵入和原位細胞移行所必需的MMP2/13的主要來源就是BMCS，而BMCS內miR-188-5p可同時調控MMP2/13的表達。發明人利用人工合成的microRNA模擬物agomir調節BMCS內miR-188-5p水平，通過常規玻璃體腔注射miR-188-5pagomir實現單一藥物產生的級聯效應對多重靶點的干預，即同時減少MMP2/13分泌，一方面抑制BMCs向CNV區域侵入，從而減少CNV的細胞和因子來源，另一方面抑制原位細胞移行，減少血管管腔形成，多靶點治療CNV，抑制病理新生血管形成，達到高效治療CNV的目的，在CNV早期即可顯著抑制其生長，縮短治療時間，避免長期反復給藥的風險。此外，由于BMCS僅在CNV局部特異性富集的特性，玻璃體內給藥僅在CNV處產生效應，達到靶向治療。

附圖說明

圖1為組織ELISA檢測不同時間點MMP-2/MMP-13蛋白表達；A、激光誘發CNV后MMP-2的表達；B、激光誘發CNV后MMP-13的表達；

圖2為實時定量PCR檢測miR188-5p的表達；

圖3為激光共聚焦顯微鏡下觀察，GFP+的BMCs為綠色，MMP-2/MMP-13/miR188-5為紅色，兩者共表達區域(箭頭)為黃色；A、激光誘發CNV后3天共定位MMP-2與GFP+的BMCs；B、激光誘發CNV后7天共定位MMP-2與GFP+的BMCs；C、激光誘發CNV后7天共定位MMP-13與GFP+的BMCs；D、激光誘發CNV后28天共定位MMP-13與GFP+的BMCs；E、激光誘發CNV后1天共定位miR188-5p與GFP+的BMCs；F、激光誘發CNV后7天共定位miR188-5p與GFP+的BMCs；

圖4為統計分析各時間點BMCs內MMP-2/MMP-13/miR188-5p的表達構成比；A、激光誘發CNV后各時間點中MMP-2的總表達量及其中BMCs的表達構成比；B、激光誘發CNV后各時間點中MMP-13的總表達量及其中BMCs的表達構成比；C、激光誘發CNV后各時間點中miR188-5p的總表達量及其中BMCs的表達構成比；

圖5為激光誘發CNV后各時間點中BMCs表達的MMP-2、MMP-13和miR188-5p在各個時間點的免疫熒光面積統計。