[發明專利]一種穩定、抗干擾能力強的腺苷脫氨酶試劑及檢測方法

在審

• 申請號: 201510588862.5
• 申請日: 2015-09-16
• 公開（公告）號: CN105238847A
• 公開（公告）日: 2016-01-13
• 發明（設計）人: 甘宜梧;史秀明;謝清華;譚柏清;王綺;趙新
• 申請（專利權）人: 山東博科生物產業有限公司
• 主分類號: C12Q1/34
• 分類號: C12Q1/34;C12Q1/28;C12Q1/26
• 代理公司: 暫無信息
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技術領域

本發明涉及腺苷檢測技術領域，特別涉及一種腺苷脫氨酶檢測試劑，還涉及使用此檢測試劑的檢測方法。

背景技術

腺苷脫氨酶（ADA）是一種與機體細胞免疫活性有重要關系的嘌呤核苷酸分解代謝酶類，20世紀50年代末，ADA活性測定引入酶學領域，目前已用于各類疾病的診斷。ADA可特異性催化腺苷產生不可逆的脫氨反應。ADA活性降低將影響核苷合成，使淋巴祖細胞轉化為淋巴母細胞及漿細胞的能力降低，從而導致免疫活性細胞減少，功能減退。體液中ADA活性己成為惡性腫瘤、結核、中樞神經系統疾病、肝病及傷寒等疾病的診斷與鑒別診斷、療效觀察和病情追隨的一個重要臨床指標。血清ADA活性升高，常見于肝炎、肝硬化、血色素沉著癥、腫瘤引起的阻塞性黃疸、前列腺和膀胱癌、溶血性貧血、傷寒、痛風、結核和心衰等。測定血液、體液中的ADA及其同工酶水平對某些疾病的診斷、鑒別診斷、治療及免疫功能的研究越來越受到臨床的重視。

目前，文獻報道的ADA活性的測定方法有氨氣敏電極法、熒光法、化學發光法、同位素法、高效液相色譜法等。這些方法儀器設備要求高，分析成本高，難于全面推廣應用。目前體液中測定常用方法為氨試劑比色法。該法操作簡單，易于推廣，但不能用于批量樣品的測定。

鑒于此，本發明在ADA催化腺苷水解生成氨和次黃嘌呤核苷反應的基礎上，再依次偶聯三個酶促反應，建立了一種既能用于手工操作，又能用于自動生化分析儀的四酶偶聯測定ADA活性的新方法。

發明內容

本發明的目的是提供一種用于檢測腺苷脫氨酶（ADA）的試劑及使用該試劑檢測ADA含量的方法。該試劑盒采用四酶偶聯法，可以有效檢測ADA的含量，抗干擾能力強，穩定性好等優點。

基本原理：腺苷在ADA作用下，生成次黃嘌呤核苷和氨，

ADA

腺苷+H₂O次黃嘌呤核苷+NH₃

次黃嘌呤核苷在嘌呤核苷磷酸化酶（PNP）催化下，與磷反應生成次黃嘌呤和核糖1-磷酸

PNP

次黃嘌呤核苷+Pi次黃嘌呤+核糖1-磷酸

次黃嘌呤在黃嘌呤氧化酶（XOD）催化氧化生成尿酸和H₂O₂：

XOD

次黃嘌呤+2H₂O+O₂尿酸+2H₂O₂

再偶聯由過氧化物酶催化的反應

POD

2H₂O₂+4-AA+EHSPT4H₂O+醌染料

通過測定紅色醌化合物在546nm處吸光度的變化速率（ΔA/min）可測得ADA活性。

本發明是通過以下步驟得到的：

一種ADA檢酸測試劑，包括試劑R1和試劑R2，所述試劑R1和試劑R2的組成如下：

試劑R1中含有

緩沖液_{··········································································}100mmol/L

4-AA_{·············································································}4mmol/L

PNP_{···············································································}0.3U/mL

XOD_{···········································································}0.4U/mL

POD_{············································································}0.1U/mL

防腐劑_{·········································································}0.5g/L；

試劑R2的組分為：