[發明專利]番茄早疫病菌PCR檢測特異引物及其檢測方法

在審

• 申請號: 201510586937.6
• 申請日: 2015-09-16
• 公開（公告）號: CN105112413A
• 公開（公告）日: 2015-12-02
• 發明（設計）人: 趙建偉;何玉仙;蘭成忠
• 申請（專利權）人: 福建省農業科學院植物保護研究所
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/68
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學俊

技術領域

本發明涉及番茄早疫病菌PCR檢測特異引物及其檢測方法，屬于農作物病害檢測、鑒定及防治技術領域。

背景技術

番茄（SolanumlycopersicumL.）是全球廣泛種植，高消費量的蔬菜作物之一，中國是番茄出口大國，在南北均有大面積栽培。番茄果實營養極為豐富，品種類型較多，既能作為水果生食，也能作蔬菜成為餐桌上的美味佳肴，還能被加工成番茄醬、番茄汁等功能性罐裝食品，為消費市場創造了良好的經濟效益。隨著栽培技術的進步，近年來主要通過保護地栽培模式生產番茄供應市場，優良的生長環境一方面延長了番茄的生長周期，促進了番茄生產，另一方面卻滋生番茄病害的發生，破壞番茄植株的生長，威脅番茄的產量及品質甚至在采后儲藏期造成危害。

由茄鏈格孢菌[Alternariasolani(ELL&Mart).sorauer]侵染引起的番茄早疫病是番茄生產上的主要病害之一，也是一種世界性病害，在美國、澳大利亞、以色列、印度、希臘等地發病率都很高，嚴重時可使產量損失35%-78%，80年代以來在我國黑龍江、吉林、山東、河北、山西、廣東、湖北、江蘇和福建等大部分地區也普通發生，危害日趨嚴重，一般年份發病率在10%左右，造成產量損失10%-30%，流行年份發病率可達100%，產量損失可達30%-40%，甚至絕收，成為露地、保護地番茄生產中的重要病害。番茄早疫病菌主要以菌絲和分生孢子隨病株殘體在土壤中越冬，氣候條件適宜時，產生新的分生孢子是初侵染的來源，病斑上的分生孢子主要靠風雨等傳播，通過氣孔或傷口侵入，在條件適宜時，病菌侵入寄主后只需2-3天就可形成病斑，再經過3-4天即可產生大量的分生孢子，引起多次重復侵染。該病可以引起落葉、落花、落果和斷技，對產量影響很大，嚴重時可以使產量損失50%以上，隨著番茄早疫病的出現及其日益嚴重，因此，很有必要建立一套快速靈敏的檢測方法用于番茄早疫病的早期診斷，防止其從發病區向未發病區傳播，對番茄早疫病的及時控制具有重要意義。

為控制番茄早疫病的發生為害，世界各國踴躍開展了番茄早疫病菌的檢測研究，傳統的檢測方法是采用選擇性培養基從發病組織中分離病原菌，再對這些病原菌的形態特征等進行鑒定，或者利用肉眼和借助顯微鏡技術對發病癥狀進行判定。傳統的檢測方法不僅費時、準確度低，而且要求檢測人員具有豐富的經驗，不能滿足病害防治中病原菌準確、快速檢測的需求，易遺漏潛育期或隱癥的病害，以致延誤病害的防治，導致病害的暴發。因此，對番茄早疫病菌的檢測、鑒定就需要在病害發病初期或在癥狀顯現之前來進行，這樣就要求有靈敏、快速的方法。

隨著科學技術的發展，具有操作簡便、快速、靈敏度高、特異性強等技術優勢的PCR(聚合酶反應polymerasechainreaction)技術已逐步應用于植物病原菌的快速檢測、鑒定，如柑橘黃龍病菌、柑橘潰瘍病菌、大豆疫霉菌、辣椒疫霉菌等等。然而，通過對現有技術的文獻檢索發現，目前尚未有利用PCR技術檢測番茄早疫病菌的報道。本發明通過對鏈格孢屬（Alternaria）真菌的ITS序列進行比對分析，設計出1對可用于特異性檢測番茄早疫病菌的引物，為番茄早疫病菌的準確鑒定和快速檢測提供技術和方法，有利于及早有效地采取防治措施。

發明內容

本發明的目的是針對現有技術中對番茄早疫病菌檢測和鑒定主要基于形態學特征、耗時長、程序繁瑣、經驗性強、準確度低，難以做到對病害發生的及時監測和控制病原菌的傳播、流行的問題，提供了一種番茄早疫病菌PCR檢測特異引物及其檢測方法，利用本發明所述的PCR檢測特異引物進行番茄早疫病菌檢測和鑒定具準確性高、特異性強、靈敏度高、易于操作、檢測時間短且結果可靠。

實現本發明的目的包括下列步驟（技術方案）：

1.番茄早疫病菌（Alternariasolani）PCR檢測特異引物的設計