[發明專利]獼猴桃AdPDC1基因與應用

在審

• 申請號: 201510582796.0
• 申請日: 2015-09-14
• 公開（公告）號: CN105112395A
• 公開（公告）日: 2015-12-02
• 發明（設計）人: 張計育;黃勝男;郭忠仁;宣繼萍;賈曉東;王剛;翟敏;劉永芝
• 申請（專利權）人: 江蘇省中國科學院植物研究所
• 主分類號: C12N9/88
• 分類號: C12N9/88;C12N15/60;C12N15/84;C12N1/21;A01H5/00;C12R1/01
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責任公司 32218
• 代理人: 傅婷婷;徐冬濤

技術領域

本發明涉及植物基因工程領域，具體涉及獼猴桃AdPDC1基因與應用。

背景技術

獼猴桃屬于獼猴桃科(Actinidiaceae)獼猴桃屬(Actinidia)落葉性藤本果樹，全世界獼猴桃屬植物有54個種21個變種，共約75個分類單位，種質資源極其豐富。1904年，新西蘭從我國引種獼猴桃，人工馴化，開始品種選育工作和商業化生產。目前市場上栽培的主要品種大多選自于美味獼猴桃和中華獼猴桃，還有少量選自軟棗獼猴桃。獼猴桃由于含有極其豐富的營養價值，尤其是Vc含量很高，被譽為“Vc之王”，所以越來越受到人們的青睞。

江蘇省夏季雨季較長，雨水較多，給獼猴桃生長生產帶來了嚴峻的挑戰。2011年，由于雨季雨水較多，澇害嚴重，揚州市大量成年獼猴桃植株死亡，給果農造成了巨大的經濟損失。因此，獼猴桃的耐澇問題是制約江蘇省獼猴桃產業發展的主要因素之一。選育耐澇性砧木和品種資源無疑是解決該問題的主要途徑。隨著分子生物學及基因工程技術在果樹領域的應用，應用基因工程技術手段來改造獼猴桃的抗性，是今后抗性研究的目標。因此，挖掘和研究獼猴桃耐澇基因將會為通過基因工程技術手段培育獼猴桃耐澇性砧木和品種資源奠定理論基礎。

目前，有關植物耐澇基因篩選方面的研究較少，關于耐澇基因的表達與調控方面的研究更是微乎其微。獼猴桃品種‘金魁’是我國選育的美味獼猴桃品種之一，抗旱、耐澇、抗凍能力較強。在獼猴桃耐澇基因挖掘方面的研究還未見報道。因此克隆和研究獼猴桃抗逆相關基因，對于開發具有中國自主知識產權的果樹抗逆基因具有重要的意義。

發明內容

發明目的：

本發明的目的是提供獼猴桃AdPDC1。

本發明的另一目的是提供該獼猴桃AdPDC1的編碼基因。

本發明的又一目的是提供該基因的功能。

本發明的目的可通過如下技術方案實現：

本發明所提供的獼猴桃AdPDC1，來源于獼猴桃優良品種‘金魁’，氨基酸序列如SEQIDNO.2所示。

本發明所述的獼猴桃AdPDC1的編碼基因，其cDNA序列如SEQIDNO.1所示，含有1821bp的最大開放閱讀框，編碼SEQIDNO.2所示的606個氨基酸殘基序列。

含有本發明AdPDC1編碼基因SEQIDNO.1的表達載體。

所述的表達載體優選將所述的獼猴桃AdPDC1的編碼基因插入到pCAMBIA1301載體的KpnⅠ和SacⅠ酶切位點間所得。

宿主菌是指將pCAMBIA1301-AdPDC1轉入的根癌農桿菌EHA105.

擴增AdPDC1cDNA全長的引物為：

AdPDC1-ORFsense：5'-TGAAGGGTTGTACTCATCATTAT-3'

AdPDC1-ORFantisense：5'-CAAGTGGCTCAACACAAACTAC-3'

實時熒光定量RT-PCR分析中涉及的AdPDC1的qPCR引物為：

AdPDC1-qPCRsense：5'-TGGAGTGTACTGGAAGTGTCAATG-3'

AdPDC1-qPCRantisense：5'-AGCAGGGAGGTCGGAACG-3'

上述獼猴桃AdPDC1、其編碼基因、含有編碼基因的表達載體在培育耐澇植物中的應用。

有益效果：

本發明在金魁獼猴桃中克隆到一個AdPDC1基因，AdPDC1參與獼猴桃耐澇脅迫過程。

AdPDC1編碼基因在澇害脅迫和鹽害脅迫誘導條件下表達。轉基因擬南芥中過量表達AdPDC1編碼基因，與對照組相比，轉基因材料表現耐澇的特性。這一結果說明AdPDC1基因參與植物抵抗澇害脅迫過程中起著非常重要的作用。另外，在植物激素ABA處理條件下，轉基因擬南芥的發芽率和根長顯著的低于野生型株系，說明獼猴桃AdPDC1基因與ABA呈現負相關的關系。

本發明的AdPDC1基因對于培育耐澇植物品種或植物改良品種具有重要意義，在作物育種方面具有廣泛的應用前景。

利用本發明的植物表達載體，將AdPDC1基因導入植物體內，可以獲得耐澇的轉基因植株。

附圖說明

圖1植物PDC基因的系統進化樹分析