[發明專利]顯微鏡下進行細胞微切割和回收的方法在審

申請號：	201510580446.0	申請日：	2015-09-14
公開（公告）號：	CN105296594A	公開（公告）日：	2016-02-03
發明（設計）人：	夏成青;陳紅梅;朱良俊;鄒媛;張磊;唐遠燕;吳薇;張梅英	申請（專利權）人：	南京艾迪康醫學檢驗所有限公司
主分類號：	C12Q1/24	分類號：	C12Q1/24
代理公司：	浙江杭州金通專利事務所有限公司 33100	代理人：	黃素萍;徐關壽
地址：	211100 江蘇省南京市江寧***	國省代碼：	江蘇;32
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摘要：
搜索關鍵詞：	顯微鏡進行細胞切割回收方法
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【說明書】：

技術領域

本發明涉及一種細胞樣本采集領域，特別涉及在普通顯微鏡下進行細胞微切割和回收的方法。

背景技術

在生命科學檢測領域，需要對組織中某一特定的細胞群體進行基因或蛋白質的研究。例如，人體腫瘤千差萬別，即使是同一個部位的腫瘤，治療效果和方法也應因人而異。隨著基因分子水平研究的不斷深入，越來越多的腫瘤細胞信號通路被發現，大量臨床研究表明，通路中特定基因的擴增/突變/表達狀態與靶向、化療藥物有效性密切相關。據統計，化療總體有效率在30％到40％，而通過基因檢測篩選出獲益病人，有效率可以提高到80％。因此利用基因檢測能最大程度地提高治療的效率，減少藥物的毒副作用，避免用藥不當貽誤治療時機。美國FDA已經強制要求用藥前進行EGFR、KRAS等基因檢測。美國國家綜合癌癥網絡已經將EGFR、KRAS、ERCC1、RRM1、HER2等基因檢測納入到癌癥治療指南中。現在腫瘤基因檢測主要針對一些實體瘤，如肺癌、腸癌、乳腺癌、胃癌等。

在分析過程中，首先需要從生物體中獲得待測組織樣本。在通常情況下，待測組織樣本中特定細胞的量是充足的。然而有時臨床樣本的量不能滿足檢測要求。例如在腫瘤分子診斷中，需要分析組織中腫瘤細胞的基因情況，但若組織樣本中的腫瘤細胞量非常少，而其他細胞或細胞間質比例很高時，提取獲得的腫瘤DNA的量不能滿足基因檢測的要求，造成假陰性的檢測結果。因此需要從多樣性的組織中進一步分離出形態單一的細胞群，提高待分析樣本中特定細胞群(例如腫瘤細胞)的占比，使基因或蛋白分析更加準確。

利用激光微切割儀器分離腫瘤組織切片中的腫瘤細胞是目前常用的方法。激光微切割具有切割效果好，收集效率高和對后續基因、蛋白檢測影響小的特點，但激光微切割成本高，耗時長。人工對腫瘤組織切片中的腫瘤細胞進行顯微鏡下的鏡檢和切割也是目前常用的切割方法。該方法成本低，對設備的要求不高。但是，一方面因切割下的細胞非常微小，肉眼幾乎不能觀察到，細小的細胞離開顯微鏡后不能被肉眼看到。另一方面腫瘤細胞在組織切片中所占比例非常低，這些因素讓顯微鏡下切割后的細胞的成功轉移變得非常困難。如何實現將切割下來的細胞準確轉移成為人工顯微鏡下鏡檢切割和富集目標細胞的一個瓶頸，是當前急需解決的技術問題。

發明內容

為了解決現有技術中的問題，本發明提供了一種顯微鏡下進行細胞微切割和回收的方法，包括以下步驟：

(1)組織切片的制備；

(2)將(1)中所述組織切片放在顯微鏡下，確定切割區域；

(3)在顯微鏡下進行腫瘤細胞切割；

(4)細胞轉移和收集：將細胞轉移膜粘貼于經(3)切割的切片上，所述細胞轉移膜粘附了切割下來的腫瘤細胞后，將所述細胞轉移膜放入細胞收集器中，腫瘤細胞與轉移膜分離，獲得經顯微切割獲得的腫瘤細胞。

進一步地，步驟(2)中，在4倍物鏡下確定腫瘤細胞的切割區域。

進一步地，步驟(3)中，將物鏡調至10倍，并在該倍數下利用切割工具進行顯微切割，切割出腫瘤細胞。

進一步地，所述切割工具選自注射器、刀片之一。

進一步地，將注射器推桿拉至最大距離，用手以握筆方式手持注射器，在顯微鏡觀察下讓注射器針頭接近切片中腫瘤細胞區域，持注射器的手控制針頭來回移動切割目標區域腫瘤細胞。

進一步地，所述細胞轉移膜是由能被消化酶消化的材料制成。

進一步地，經消化酶消化，轉移膜被消化酶消化，腫瘤細胞與轉移膜分離。