[發明專利]耐受高濃度煙堿的基內蒼白桿菌CGMCC No.10670及其應用

有效

• 申請號: 201510579110.2
• 申請日: 2015-09-06
• 公開（公告）號: CN105112336B
• 公開（公告）日: 2018-11-13
• 發明（設計）人: 王倩;劉好寶;蘇玉龍;史素娟;毛靜靜;張鴿
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院煙草研究所
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A62D3/02;C12R1/01;A62D101/26
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明提供了一種耐受高濃度煙堿且具降解煙堿能力的基內蒼白桿菌(Ochrobactrum intermedium)，其保藏編號為：CGMCC No.10670，保藏日期為2015年3月30日。此外，本發明還提供了利用保藏編號為：CGMCC No.10670的基內蒼白桿菌降解煙堿并耐受高濃度的煙堿的應用方法。本發明CGMCC No.10670基內蒼白桿菌一種分離的全新的菌株，該基內蒼白桿菌能夠耐受高濃度的煙堿，耐受濃度高達10g/L。該基內蒼白桿菌能夠有效的降解煙堿，解決高濃度煙堿廢棄物中的煙堿降解。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及基內蒼白桿菌新的菌株以及該菌株的應用。

背景技術

尼古丁，又叫煙堿[nicotine，1-methyl-2-(3-pyridyl-pyrrolidine)]，屬于吡啶族生物堿，在煙草生物堿中煙堿是最主要生物堿。煙堿是一種中樞神經興奮劑，吸食后使人產生生理和心理上的依賴性，是讓人成癮的物質。利用微生物處理來降解煙堿這種方法不會造成煙香的損失還可以改進煙氣品質，可以提高煙葉資源的利用率，有研究開發價值，更可以有效降低尼古丁對人的健康的損害，減少煙草工業產生的大量的廢棄物對生態環境的污染。因此其開發應用將具有巨大的發展潛力和應用前景。

Brown&Williamson煙草公司利用假單胞菌(Pseudomonas putid)對煙草中的煙堿進行降解，發現用假單胞桿菌菌液對白肋煙和烤煙的混合煙絲(1∶1)進行18h處理后，煙堿含量平均從2.0％降到了0.85％。此外，有大量的降解煙堿的微生物被分離出來，包括假單胞菌、中間蒼白桿菌、陰溝腸桿菌、曲霉等。但是這些菌普遍受煙堿耐受性的影響，耐受煙堿的濃度多小于4g/L，高濃度煙堿的不耐受性影響了其在煙草預處理以及高濃度煙堿廢水的處理領域的應用。為此，本發明旨在提供分離篩選一種全新的基內蒼白桿菌新的菌株，并且提供該菌株降解煙堿的方法。

發明內容

本發明針對目前煙堿降解微生物效率不高，特別是用于降解煙堿的微生物不能夠耐受高濃度的煙堿的現狀，篩選具有較好的煙堿耐受性的煙堿降解菌基內蒼白桿菌(Ochrobactrum intermedium)，以及，提供一種該菌株降解煙堿的方法。

本發明提供了一種耐受高濃度煙堿且具降解煙堿能力的基內蒼白桿菌(Ochrobactrum intermedium)，其保藏編號為：CGMCC No.10670，保藏日期為2015年3月30日。

進一步的，CGMCC No.10670基內蒼白桿菌(Ochrobactrum intermedium)是從青島卷煙廠周圍土壤中通過選擇性培養基分離得到的。

其生物學特征如下：

該菌為革蘭陰性桿菌，菌體細胞為短桿狀，沒有芽孢，在顯微鏡下觀察菌體的大小為0.2～0.4μm×0.4～1.1μm。菌體細胞呈短桿狀，排列不整齊。在LB固體培養基表面，菌體形成不透明的淺黃色小菌落，菌落干，邊緣不整齊。

上述基內蒼白桿菌菌株的經通用引物PCR獲得16S rDNA序列與其它多株腸桿菌的16S rDNA序列有95％的相似性但是不同。

其中上述PCR的引物為fD1：AGAGTTTGATCCTGGCTCAG，

rP2：CGGCTACCTTGTTACGACTT。

進一步的，本發明還公開了耐受高濃度煙堿且具降解煙堿能力的基內蒼白桿菌的應用方法，即，利用保藏編號為：CGMCC No.10670的基內蒼白桿菌降解煙堿并耐受高濃度的煙堿。具體為：

保藏編號為：CGMCC No.10670的基內蒼白桿菌能夠在以煙堿作為碳源的培養基里快速生長并降解煙堿，