[發明專利]一種篩查多發性內分泌瘤的基因診斷試劑盒有效

申請號：	201510575020.6	申請日：	2015-09-10
公開（公告）號：	CN105063227A	公開（公告）日：	2015-11-18
發明（設計）人：	徐克成;牛立志;陳繼冰;李家亮;穆峰;李海波;樸相浩;何麗華	申請（專利權）人：	廣州復大醫療股份有限公司復大腫瘤醫院
主分類號：	C12Q1/68	分類號：	C12Q1/68
代理公司：	廣州三環專利代理有限公司 44202	代理人：	劉宇峰
地址：	510665 廣***	國省代碼：	廣東;44
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摘要：
搜索關鍵詞：	一種多發性內分泌基因診斷試劑盒
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【說明書】：

技術領域

本發明涉及一種篩查多發性內分泌瘤的基因診斷試劑盒，更具體說是一種利用MEN1基因外顯子突變檢測的試劑盒，該試劑盒及方法可用于該疾病的輔助診斷，屬于生物技術領域。

背景技術

多發性內分泌腫瘤(multipleendocrineneoplasia，MEN)是一組多個不同的內分泌腺體在同一個體先后或同時發生、以功能亢進為主要表現的顯性遺傳性疾病。其中，多發性內分泌腫瘤I型(MEN-1)主要累及甲狀旁腺、垂體和胰腺內分泌。國外文獻報道MEN-1的發病率約為1/20000～1/50000。

MEN-1主要由胚系的MEN1基因發生突變所致，外顯率很高，至60歲時95％～100％的病人發病。MEN1基因為一抑癌基因，位于染色體11q13，全長9kb，包含10個外顯子，編碼一個由610個氨基酸組成的蛋白menin。MEN1基因突變類型眾多，均造成menin表達缺失，而menin掌控細胞增殖的終止，其功能異常導致細胞過度增殖，發生腫瘤。病人出生時，已在生殖細胞水平攜帶一個異常突變的等位基因，即雜合缺失(LOH)，這是第一次打擊，但由于另一個等位基因正常，所以并未發生具體病變。而一旦在體細胞水平發生另一個正常等位基因丟失的第二次打擊，則出現病癥。如第二次打擊發生在胰島細胞內，病人就發生胰島細胞腫瘤。

多發性內分泌腫瘤I型(MEN-1)由MEN1抑癌基因突變所致，其具有病理類型多樣、發病早、多發等特點，基因測序是重要診斷方法。Rrandi等在多內分泌腺瘤病1型的診療指南中指出，對于多內分泌腺瘤病1型的先證者及其未受累的親屬，都應當進行MEN1基因的篩查，所有的家系成員都有可能發生MEN1基因突變。對于基因篩查發現的MEN1突變基因攜帶者，應當定期進行生化和影像檢查，篩查腫瘤的發生。

綜上，對Mne1基因外顯子區進行分型檢測可為多發性內分泌瘤1型早期篩查已經臨床診斷提供依據。開發快速、高效、準確、便捷、經濟的檢測MEN1基因多態性的試劑盒將為多發性內分泌瘤1型診斷及時性及準確性。

Sanger測序技術是一種成熟的DNA序列分析技術，該技術可對未知DNA序列進行分析，DNA片段也無需熒光標記，是一種通用型技術平臺。該技術具有操作簡單、檢測成本低、所需樣本量小、快捷、準確、結果分析簡便，符合臨床應用檢測要求。

發明內容

本發明的目的在于提供一種篩查多發性內分泌瘤的基因診斷試劑盒，適用于臨床檢測多發性內分泌瘤診斷基因MEN1突變，能實現快速、簡便、準確、高效、實用、經濟的檢測多發性內分泌瘤I型早期篩查及臨床診斷。

為了達到上述目的，本發明提供的技術方案為：

一種篩查多發性內分泌瘤的基因診斷試劑盒，包含如下引物：

(1)擴增引物：

MEN1exon2(SEQIDNO.1)上游引物：5’-TGGAACCTTAGCGGACCCT-3’(SEQIDNO.1)

MEN1exon3(SEQIDNO.2)上游引物：5’-AGGAGAATCTGAGGTTGGGT-3’(SEQIDNO.2)

MEN1exon4(SEQIDNO.3)上游引物：5’-GGGCCATCATGAGACATAATG-3’(SEQIDNO.3)

MEN1exon5/6(SEQIDNO.4/SEQIDNO.5)上游引物：5’-GATAGGCTAAGGACCCGTTCT-3’(SEQIDNO.4)

MEN1exon7(SEQIDNO.6)上游引物：5’-GGCTGCCTCCCTGAGGATC-3’(SEQIDNO.5)