[發明專利]一種百日草脫毒種苗的高效擴繁方法

在審

• 申請號: 201510572648.0
• 申請日: 2015-09-10
• 公開（公告）號: CN105165610A
• 公開（公告）日: 2015-12-23
• 發明（設計）人: 不公告發明人
• 申請（專利權）人: 陳丁龍
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;A01G31/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種百日草脫毒種苗的高效擴繁方法，其特征在于：該方法步驟如下：

1）百日草脫毒苗前處理：將百日草脫毒苗清洗干凈并表面消毒，在無菌條件下切取葉柄和花托，移入裝有配制好的不定芽誘導培養基廣口瓶中；

2）不定芽的誘導：將接種有脫毒苗外植體的不定芽誘導培養基廣口瓶置于消毒處理過的培養室中光培養，誘導出不定芽；

3）切割不定芽繼代增殖：在無菌條件下將不定芽切下，移入裝有增殖培養基的廣口瓶中培養，得到大量百日草幼苗；

4）煉苗：逐步采用增強培養光照、降低培養溫度的方法進行煉苗；

5）水培生根處理：將煉苗后的脫毒試管苗從廣口瓶中取出，保留原有根系，再將組培苗栽于水培盤中的栽培板上，水培盤中加入生根營養液；

6）水培壯苗：生根培養7天后，倒掉生根營養液，加入壯苗營養液；

7）移栽：將脫毒苗移栽到消過毒的基質上，置于室外自然光下生長。

2.根據權利要求1所述的百日草脫毒種苗的高效擴繁方法，其特征在于：該方法的詳細步驟如下：

1）百日草脫毒苗前處理：

將百日草脫毒苗先用自來水反復沖洗，用毛刷蘸取洗潔精洗一遍后接著用超純水沖洗干凈，用70%酒精浸泡15s，再用無菌水沖洗兩次，0.1%升汞內加數滴吐溫20溶液浸泡5min，用無菌水沖洗4-5次，濾紙吸干，將百日草脫毒苗的葉柄和花托移入裝有不定芽誘導培養基的廣口瓶中；

2）不定芽的誘導：

為防百日草脫毒苗在生產過程中被病毒再浸染，培養室先經過消毒，消毒劑選用40%甲醛10ml/m³、高錳酸鉀5g/m³，對整個培養室進行熏蒸2小時，熏蒸后，再采用75%乙醇擦拭培養架進行表面消毒，然后將接種有百日草脫毒苗外植體的不定芽誘導培養基廣口瓶置于消毒處理過的培養室中光培養，培養室溫度控制為26±1℃，以熒光燈為光源，光照強度控制為1500-2000Lx，光周期控制為光14h/暗10h，25-30天誘導出不定芽；

3）切割不定芽繼代增殖：

在無菌條件下將誘導2-3cm的不定芽從外植體上完整的切下，轉接到裝有增殖培養基的廣口瓶中，培養室溫度控制為24±1℃、光照強度控制為1500-2000Lx、光周期控制為光12h/暗12h下培養，培養15-25天后可得到大量百日草幼苗；

4）煉苗：

篩選5-8cm的百日草脫毒試管苗，轉移到光照強度為2500-3500lx的條件下，3-5天后，將培養溫度降低為20-22℃，再過3-5天，打開廣口瓶封口，繼續煉苗3-5天；

5）水培生根處理：

為減少轉接對脫毒試管苗根系帶來的傷害，轉接前向廣口瓶內加入少量水，并用鑷子輕輕攪動培養基，以免把苗子倒出時損傷根，試管苗倒出后洗凈根上的培養基，移栽到裝有生根培養液的水培盤中的栽培板上，栽培密度1000-1200苗/m²，株距2-3cm，行距2-3cm，水培器皿用盆底長×寬=44×32cm，盆高=15cm的塑料盆作為栽培盆，每盆放2L營養液，并有定植孔間距為2cm-3cm的栽培板漂浮在營養液上，將脫毒苗上方搭上一層透明的塑料薄膜，使其處于溫度22-25℃、濕度≥90%、光照強度為2000-3000lx的清潔的溫室內環境生長；

6）水培壯苗：

生根培養7天后，脫毒苗根系基本發育完全，此時，撤掉塑料薄膜，倒掉生根營養液，給幼苗澆施壯苗營養液；

7）移栽：

當百日草脫毒苗長到12-15cm時，移栽到消過毒的基質上，移栽密度為行距15cm、株距10cm，塑料薄膜覆蓋保濕，10-15天后逐步除去薄膜，置于室外自然光下生長。

3.根據權利要求1或2所述的百日草脫毒種苗的高效擴繁方法，其特征在于：百日草品種選為芳菲1號、芳菲2號和芳菲3號。

4.根據權利要求1或2所述的百日草脫毒種苗的高效擴繁方法，其特征在于：步驟1）和2）中的不定芽誘導培養基的配方為：MS+0.5mg/LKT+1.5mg/L6-BA+0.4mg/LGA+0.3g/LCH+3%蔗糖+6.5g/L瓊脂，pH為5.8。

5.根據權利要求1或2所述的百日草脫毒種苗的高效擴繁方法，其特征在于：步驟3）中的增殖培養基配方為：MS+0.5mg/L6-BA+0.5mg/LKT+3%蔗糖+6.5g/L瓊脂，pH為5.8。