[發明專利]一種從魚類歷史標本中提取DNA的方法

在審

• 申請號: 201510568890.0
• 申請日: 2015-09-09
• 公開（公告）號: CN105063019A
• 公開（公告）日: 2015-11-18
• 發明（設計）人: 陳善元;肖蘅;李春青
• 申請（專利權）人: 云南大學
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 昆明科陽知識產權代理事務所 53111
• 代理人: 董建國

技術領域

本發明屬于分子生物學領域，具體涉及從魚類歷史標本中提取DNA的方法。

背景技術

我國地形地貌復雜，湖泊眾多，分布在我國的魚類資源十分豐富，但因環境變化及人為影響，很多魚類物種資源在我們人類還沒來得及認識就消失了，只剩下早期留下的浸泡標本，成為證明它們存在的唯一線索。分子生物學技術發展為探索這些魚類物種資源提供了新的途徑，獲取DNA是開展分子生物學研究的第一步，但從經過長時間浸泡的標本中提取DNA也成了研究這些魚類的首道屏障。

經過長時間浸泡后，不僅細胞結構發生了變化，細胞內的大分子物質已經降解或者正在降解，為了得到相對完整的DNA序列，人們在DNA析出和純化過程中花費了大量的精力和時間，卻忽略了材料的預處理步驟，大多只是進行簡單的清洗就進入了破碎環節。

發明內容

為解決上述問題，在對酒精浸泡的歷史標本進行DNA提取時，加入預處理環節，主要包括以下6個步驟：

（1）將組織材料放于70%的酒精中浸泡20分鐘以上；

（2）將組織材料轉于50%的酒精中浸泡15分鐘以上；

（3）將組織材料轉于30%的酒精中浸泡10分鐘以上；

（4）將組織材料轉于10%的酒精中浸泡10分鐘以上；

（5）將組織材料轉于無菌水中浸泡10分鐘以上；

（6）將組織材料轉于TE緩沖液（10mMTris-HCl和1mMEDTA，pH8.0）中浸泡10分鐘以上；

以上各步驟中，液體的體積至少是所處理材料體積的10倍以上。

進一步，步驟（1）的浸泡時間為40-60分鐘。

進一步，步驟（2）的浸泡時間為30-40分鐘。

進一步，步驟（1）的浸泡時間為40分鐘，步驟（2）的浸泡時間為40分鐘，步驟（3）-（6）的浸泡時間為10分鐘。

經研究發現，將酒精中的標本進行預處理，用酒精水溶液逐步置換出標本組織中的酒精，再將標本組織轉移至TE緩沖液中，還原至近似體液中的細胞后再進入破碎環節，能提高DNA的產量和質量。

經過上述處理后，從酒精浸泡的歷史標本中提取的DNA產量和質量都有很大的提高。

具體實施方式

下面通過實施例對本發明做進一步說明。

取酒精浸泡60年的鯉科魚類標本2克，進入下列處理程序：

（1）將組織材料放于50毫升70%的酒精中浸泡40分鐘；

（2）將組織材料轉于50毫升50%的酒精中浸泡40分鐘；

（3）將組織材料轉于50毫升30%的酒精中浸泡10分鐘；

（4）將組織材料轉于50毫升10%的酒精中浸泡10分鐘；

（5）將組織材料轉于50毫升無菌水中浸泡10分鐘；

（6）將組織材料轉于50毫升TE溶液（10mMTris-HCl和1mMEDTA，pH8.0）中浸泡10分鐘；

組織材料預處理后進入破碎和DNA提取的其它環節，最后得到了50ngDNA,平均長度達到4kb,與對照相比，產量提高了100%，長度增加了300%。